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专利号: 2015104337841
申请人: 中国科学院西北高原生物研究所
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种利用响应曲面法优化白刺多糖的复合酶微波提取方法,包括以下步骤:⑴样品制备:

将新鲜白刺果实洗净,在30~35℃温度下烘干48~72h后粉碎至40~80目,按10~30 mL/g料液比加入体积浓度为80%的乙醇溶液,在18℃~25℃浸泡2~4h后过滤,得到滤渣,该滤渣于40~60℃下干燥12~24h,即得脱除脂类、色素和小分子糖的白刺果粉;然后在微波反应器中,按10~18 mL/g不同的料液比加入复合酶溶液,40~50℃静置浸泡1.5~2.5h的不同时间,在330~370W的不同微波功率下按25~35 min的不同时间进行反应提取,提取后的溶液分别以4000~5000转/min进行离心,15~20min后收集上清液A,该上清液A经50~60℃真空旋转蒸发浓缩至原体积的1/6~1/8后,得到浓缩产物;所述浓缩产物中加入其体积3~4倍的无水乙醇溶液混匀,当其溶液中乙醇浓度为80%时,于2~6℃下静置12~24h,再分别以

4000~5000转/min进行离心,15~20min后收集沉淀;沉淀加水复溶后,以4000~5000转/min进行离心,15~20min后收集上清液B,该上清液B于-70℃~ -85℃预冻4~6 h,最后在大气压力为10~100Pa、温度为-55℃~ -70℃的条件下冷冻干燥24~72h,得到对应于不同微波功率的白刺多糖提取物干燥粉末;

所述复合酶溶液是指蛋白酶、纤维素酶和果胶酶等质量混合后加去离子水配制而成的pH为4~5的溶液;

⑵用苯酚-硫酸法测定每个提取液中多糖含量:

①标准曲线制作:

准确称取10 mg葡萄糖,配制成浓度为0.1 mg/mL的溶液,分别取0 mL、0.1 mL、0.2 mL、

0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL,依次补加蒸馏水至1 mL;

以蒸馏水作对照,分别向其中加入0.5 mL 6%的苯酚,振荡摇匀,垂直快速加入2.5 mL浓H2SO4,振荡摇匀后,静止约30 min,冷却至室温,然后在490 nm波长下测吸光值,以糖溶液浓度μg/mL为横坐标,吸光值为纵坐标,绘制标准曲线;

②样品中多糖含量的测定:

将样品配置成60 μg/mL的溶液,取样品1 mL,不加蒸馏水,其余操作均与所述步骤①制作标准曲线相同;在490 nm波长下比色,所得数值在标准曲线上查出相应的总糖含量;

⑶实验设计与统计分析:

①单因素试验:

依次改变微波功率、提取时间、浸泡时间、料液比进行单因素试验,用苯酚-硫酸法测定所得的白刺多糖提取物中多糖的含量,并按下式计算多糖产率,每次处理重复三次:多糖产率(%)=[(多糖含量×提取物重量)/ 果粉重量]×100%;

②响应面法优化设计:

根据单因素试验结果,选取多糖提取效果影响较显著的微波功率、提取时间、浸泡时间、料液比这4个因素,利用Design Expert 8.0软件根据Box-Behnken设计原则进行实验设计,以微波功率X1、提取时间X2、浸泡时间X3和料液比X4为自变量,以多糖的产率为响应值y,建立多元二次回归方程:-4

y=-23.15167+0.12368X1+0.37283X2-0.84933X3+0.096067X4-6.4×10 X-4 -4 -3 -4

1X2 +5.0×10 X1X3+ 3.1×10 X1X4- 3.0×10 X2X3+ 7.0×10 X2X4- 0.031X3X4- -4 2 -3 2 -3 2 -3 2

1.563×10 X1- 2.42×10 X2+0.462×10 X3- 5.89×10 X4;

⑷实验结果分析与优化:

利用Design Expert 8.0软件根据多元二次回归方程进行绘图分析,得到回归方程的响应面及其等高线图。

2.如权利要求1所述的一种利用响应曲面法优化白刺多糖的复合酶微波提取方法,其特征在于:所述白刺为唐古特白刺(Nitraria taugutorum)或西伯利亚白刺(Nitraria sibirica)的成熟果实。