1.带鱼肝脏抗菌肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）带鱼肝脏酶解物的制备：带鱼肝脏从冰冻带鱼中取出、解冻，用高速组织捣碎机匀浆，然后按照固液比1 g：8～10mL加入0.02 mol/L，pH 6.5～7.5的磷酸盐缓冲液混匀，并加热至20～30℃；在功率为900W，频率为30～50kHz 超声波发生器内超声提取90～

120 min，按照肝脏质量的0.3～0.5%加入中性蛋白酶，于温度55～65℃下酶解6～8 h，

10 000 r/min离心25～30 min，取上清液采用3 kDa超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于3 kDa部分，冷冻干燥，得超滤酶解物；

2）带鱼肝脏抗菌肽的制备：将制备的带鱼肝脏超滤酶解物依次经大孔树脂除杂、凝胶过滤层析、细胞膜色谱纯化和反相高效液相色谱（RP-HPLC）制备，得到带鱼肝脏抗菌肽。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤2）的大孔树脂除杂、凝胶过滤层析、细胞膜色谱纯化和反相高效液相色谱（RP-HPLC）制备的具体过程为：大孔树脂除杂：将得到的超滤酶解物用双蒸水制成浓度为10～15 mg/mL溶液，以2～

3 mL/min的流速加入到D201大孔树脂层析柱，用2～3倍柱体积的双蒸水洗脱除去杂质，然后用3～5倍柱体积75%乙醇进行洗脱，洗脱液于50 ℃以下低压旋蒸除去乙醇后，冷冻干燥得大孔树脂制备酶解物。

3.将上述大孔树脂制备酶解物溶于三蒸水配成浓度为10～15 mg/mL的溶液，经过葡聚糖凝胶G-25柱层析分离，用三蒸水进行洗脱，根据225 nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，其中，对大肠杆菌（Escherichia coli）和巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）抑制率最高组分为凝胶过滤层析酶解物。

4.将上述凝胶过滤层析酶解物用三蒸水配成80～100 μg/mL的溶液，加入到细胞膜色谱柱进行纯化，根据225 nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，其中，对大肠杆菌和巨大芽孢杆菌抑制率最高组分为细胞膜色谱纯化酶解物。

5.将上述细胞膜色谱纯化酶解物用双蒸水配成80～100 μg/mL的溶液，利用RP-HPLC进行纯化得到高活性抗菌肽Lys-Val-Phe-Trp-Gly-Leu-His-Pro。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述细胞膜色谱条件为：细胞膜为巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）的细胞膜；进样量15～20 μL；细胞膜色谱柱规格为

150 mm × 4.6mm，5 μm；柱温为37 ℃；流动相为三蒸水；紫外检测波长225 nm；流速为

0.3～0.5 mL/min。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述RP-HPLC条件为：进样量15～20 μL；色谱柱是规格为250 mm × 4.6mm，5 μm的Zorbax C18；流动相为含0.1%三氟乙酸的20%乙腈；洗脱速度为0.8～1.0 mL/min；紫外检测波长为225 nm。