本发明公开一种具有环酰亚胺水解酶活性D‑海因酶的工程菌及其构建、培养方法和应用。本发明首先提供一种工程菌,该工程菌可以表达一种具有环酰亚胺水解酶活性的D‑海因酶;其构建方法是将该酶基因克隆到质粒pET‑20b,得到重组质粒pET20b‑hyd,然后转入大肠杆菌细胞。本发明还提供了利用该工程菌转化2,3‑吡啶二甲酰亚胺生成3‑氨基甲酰基‑α‑吡啶甲酸以及转化邻苯二甲酰亚胺生成邻甲酰胺苯甲酸的方法。在利用该工程菌转化复杂环酰亚胺底物生成半酰胺时,能够特异性水解底物分子中两个酰胺键中的一个,避免了副反应的产生;该方法利用酶法生物转化技术,生产工艺简单、环保,与现有化学生产方法相比,相对生产成本低。