本发明公开了一种马桑树皮总多酚的分离纯化方法,包括以下步骤:将马桑树皮粉碎后得到马桑树皮粉,往马桑树皮粉中加入乙醇水溶液,常温浸泡后升温提取,提取完毕后过滤,得马桑树皮乙醇提取液和提取渣;往提取渣中加入酸性混合液,在超声条件下浸泡,浸泡完毕后过滤,得到酸性提取液;合并马桑树皮乙醇提取液和酸性提取液,得到总提取液;将总提取液浓缩后以水稀释,然后萃取除杂,得到马桑树皮稀释液;采用大孔树脂对马桑树皮稀释液进行纯化,收集洗脱液,减压浓缩干燥后即得马桑树皮总多酚。本发明的工艺操作简单,马桑树皮总多酚的分离纯化效率高,得到的总多酚纯度达到80%以上,适合于工业化生产,具有广泛的应用前景。