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专利号: 2025106874214
申请人: 云南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一株诺卡氏菌Nocardia sungurluensisYINM00009,保藏编号为GDMCC No:65367。

2.权利要求1所述诺卡氏菌Nocardia sungurluensisYINM00009在制备新型环脂肽类化合物中的应用;

所述新型环脂肽类化合物的结构式如式Ⅰ~式Ⅸ所示:

3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于:新型环脂肽类化合物的制备方法如下所述:

(1)菌体活化:将诺卡氏菌YINM00009接种到活化培养基中活化备用;

(2)菌种制备:将步骤(1)中活化好的菌体接入种子培养基中摇床培养得到菌种;

(3)发酵过程:将步骤(2)中制备好的菌种接种于发酵培养基中摇床发酵培养,得到发酵液;

(4)发酵结束后,发酵液用等体积的乙酸乙酯萃取,浓缩得到粗提物,粗提物用二氯甲烷‑甲醇溶解后,采用二氯甲烷‑甲醇洗脱液进行凝胶柱层析洗脱,得到洗脱液,通过TLC点板、展开和显色后,依据点的颜色和Rf值大小对洗脱液进行合并;

(5)将合并后的洗脱液再次进行TLC点板和HPLC分析,选取TLC点板反应点数多和HPLC分析峰多的洗脱液继续进行洗脱液继续分离,将选取好的洗脱液与硅胶混合均匀,采用石油醚‑乙酸乙酯洗脱液进行正向硅胶柱层析梯度洗脱,最后使用半制备高效液相色谱纯化得到式Ⅰ~式Ⅸ所示的化合物。

4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于:步骤(1)中活化培养基的成分为:酵母提取物4.0±0.5g/L,葡萄糖4.0±0.5g/L,麦芽提取物10.0±0.5g/L,琼脂15.0±0.5g/L,pH7.0±0.2,培养温度为28±0.5℃,培养时间为5~7d。

5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于:步骤(2)中种子培养基的成分为:酵母提取物4.0±0.5g/L,葡萄糖4.0±0.5g/L,麦芽提取物10.0±0.5g/L,pH7.0±0.2;培养温度为

28±0.2℃,培养时间为3~5d。

6.根据权利要求3所述的应用,其特征在于:步骤(3)中发酵培养基的成分为:蔗糖100±5g/L,葡萄糖10±0.5g/L,酸水解酪蛋白0.12±0.1g/L,酵母提取物5g±0.5/L,3‑(N‑吗啉)丙磺酸21±0.5g/L,微量元素1.0mL,K2SO40.25±0.1g/L,MgCl2·6H2O 10g±0.5/L,pH=7.0±0.2;菌种的接种量为发酵培养基体积的10%;培养温度为28±0.2℃,培养时间为

10~20d。

7.根据权利要求3所述的应用,其特征在于:步骤(4)中乙酸乙酯萃取3次;溶解粗提物使用的二氯甲烷‑甲醇溶液中,二氯甲烷与甲醇的体积比为1:2;所用凝胶柱层析填料为羟丙基葡聚糖凝胶;凝胶柱层析洗脱中二氯甲烷‑甲醇洗脱液中二氯甲烷与甲醇的体积比为

1:1。

8.根据权利要求3所述的应用,其特征在于:步骤(5)中TLC点板的展开剂为二氯甲烷与甲醇的混合溶液,二氯甲烷与甲醇体积比为15:1;正向硅胶柱层析梯度洗脱中所用石油醚‑乙酸乙酯洗脱液中石油醚与乙酸乙酯的体积比依次为30:1、20:1、10:1、5:1、3:1、2:1、1:1、

1:2,1:3、1:5、1:10。

9.权利要求2中所述新型环脂肽类化合物在制备治疗肺癌、肝癌、乳腺癌或结肠癌药物中的应用,其特征在于:式Ⅰ所示化合物在制备治疗肺癌和肝癌药物中的应用;式Ⅱ所示化合物在制备治疗白血病、肺癌、肝癌和结肠癌药物中的应用;式Ⅲ所示化合物在制备治疗白血病、肺癌、肝癌、乳腺癌和结肠癌药物中的应用;式Ⅳ所示化合物在制备治疗白血病、肺癌、肝癌和结肠癌药物中的应用;式Ⅴ所示化合物在制备治疗肺癌、肝癌和结肠癌药物中的应用;式Ⅵ所示化合物在制备治疗肺癌药物中的应用;式Ⅶ所示化合物在制备治疗白血病、肺癌、肝癌、乳腺癌和结肠癌药物中的应用;式Ⅷ所示化合物在制备治疗白血病、肺癌和乳腺癌药物中的应用;式Ⅸ所示化合物在制备治疗白血病、肺癌、肝癌、乳腺癌和结肠癌药物中的应用。