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专利号: 2025102283304
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种共轭聚酮还原酶突变体,其特征在于所述共轭聚酮还原酶突变体为下列之一:(1)将SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列第64位丙氨酸突变为甲硫氨酸,氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示;

(2)将SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列第64位丙氨酸突变为甲硫氨酸,且第206位丝氨酸突变为半胱氨酸,氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

2.如权利要求1所述的共轭聚酮还原酶突变体的编码基因。

3.含有如权利要求2所述的共轭聚酮还原酶突变体的编码基因的重组载体。

4.含有如权利要求2所述的共轭聚酮还原酶突变体的编码基因的重组基因工程菌。

5.如权利要求4所述的重组基因工程菌,其特征在于所述重组基因工程菌为同时表达共轭聚酮还原酶突变体、葡萄糖脱氢酶和L‑泛解酸内酯脱氢酶的三酶共表达工程菌。

6.如权利要求5所述的重组基因工程菌,其特征在于所述重组基因工程菌为同时表达分子伴侣pGro7、共轭聚酮还原酶突变体、葡萄糖脱氢酶和L‑泛解酸内酯脱氢酶的分子伴侣三酶共表达工程菌。

7.如权利要求1所述的共轭聚酮还原酶突变体或如权利要求4所述的重组基因工程菌在催化外消旋泛解酸内酯合成光学纯D‑泛解酸内酯中的应用。

8.如权利要求7所述的应用,其特征在于所述应用的方法为:以含有所述的共轭聚酮还原酶突变体的编码基因的重组基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体为催化剂,以外消旋泛+解酸内酯为反应底物,以葡萄糖为辅底物,辅酶NADP的作用下,以PB缓冲液为反应介质构成转化体系,进行反应制得D‑泛解酸内酯;含有所述的共轭聚酮还原酶突变体的编码基因的重组基因工程菌为同时表达共轭聚酮还原酶突变体、葡萄糖脱氢酶和L‑泛解酸内酯脱氢酶的三酶共表达工程菌,或同时表达分子伴侣pGro7、共轭聚酮还原酶突变体、葡萄糖脱氢酶和L‑泛解酸内酯脱氢酶的分子伴侣三酶共表达工程菌。

9.如权利要求8所述的应用,其特征在于所述三酶共表达工程菌或分子伴侣三酶共表达工程菌中,共轭聚酮还原酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示;L‑泛解酸内酯脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示;葡萄糖脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。