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专利号: 2025101100772
申请人: 西部(重庆)科学城种质创制大科学中心
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.过表达CsAHL15基因提高柑橘溃疡病抗性的应用,其特征在于,所述CsAHL15基因为一种含有DNA结合钩基核定位蛋白的转录因子,所述CsAHL15编码序列如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。

2.CsAHL15提高柑橘溃疡病抗性的方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)克隆柑橘CsAHL15编码序列,所述CsAHL15编码序列如SEQ ID No.1所示;

(2)构建CsAHL15过表达载体;

(3)CsAHL15过表达载体转化柑橘,经鉴定得到溃疡病抗性提高的转基因植株。

3.根据权利要求2所述的CsAHL15提高柑橘溃疡病抗性的方法,其特征在于,步骤(1)中,柑橘CsAHL15编码序列的克隆方法为:提取柑橘总RNA,反转录为cDNA作为模板,利用引物OE‑CsAHL15‑F和OE‑CsAHL15‑R进行PCR扩增并回收CsAHL15编码序列DNA片段,其中,所述引物OE‑CsAHL15‑F和OE‑CsAHL15‑R分别如SEQ ID No. 2和SEQ ID No. 3所示的核苷酸序列。

4.根据权利要求2所述的CsAHL15提高柑橘溃疡病抗性的方法,其特征在于,步骤(2)中,CsAHL15过表达载体的构建方法为:KpnI和EcoRI酶切回收的CsAHL15编码序列DNA片段,再连接到KpnI和EcoRI酶切回收的pLGNe载体上,构建过表达载体pLGNe‑CsAHL15。

5.根据权利要求2所述的CsAHL15提高柑橘溃疡病抗性的方法,其特征在于,步骤(3)中,CsAHL15过表达载体转化柑橘的方法为:过表达载体pLGNe‑CsAHL15通过电击法转化根癌农杆菌,再用根癌农杆菌介导转化柑橘外植体。

6.根据权利要求5所述的CsAHL15提高柑橘溃疡病抗性的方法,其特征在于,所述转化后的柑橘外植体细胞还经GUS染色鉴定、PCR鉴定、qRT‑PCR分析和CsAHL15表达量后得到转基因植株。

7.根据权利要求6所述的CsAHL15提高柑橘溃疡病抗性的方法,其特征在于,所述PCR鉴定转基因植株的引物为:ID‑CsAHL15‑F和ID‑CsAHL15‑R,所述ID‑CsAHL15‑F是根据CsAHL15基因首端序列设计,所述ID‑CsAHL15‑R是取自pLGNe载体上CaMV 35S后的一段序列,所述ID‑CsAHL15‑F和ID‑CsAHL15‑R分别为SEQ ID No. 4和SEQ ID No. 5所示的核苷酸序列。

8.根据权利要求6所述的CsAHL15提高柑橘溃疡病抗性的方法,其特征在于,所述qRT‑PCR分析CsAHL15表达量的引物为:RT‑CsAHL15‑F和RT‑CsAHL15‑R,所述RT‑CsAHL15‑F和RT‑CsAHL15‑R分别为SEQIDNo.6和SEQIDNo. 7所示的核苷酸序列。

9.根据权利要求2所述的CsAHL15提高柑橘溃疡病抗性的方法,其特征在于,步骤(3)中得到转基因植株后,对转基因植株进行抗性评价,判定CsAHL15过表达提高了柑橘溃疡病抗性。