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专利号: 2025101100700
申请人: 西部(重庆)科学城种质创制大科学中心
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.过表达CsMBL1基因在提高柑橘对溃疡病抗性中的应用,其特征在于,所述CsMBL1基因的核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示。

2.根据权利要求1所述的过表达CsMBL1基因在提高柑橘对溃疡病抗性中的应用,其特征在于,所述CsMBL1基因编码的蛋白为柑橘球型甘露糖特异性结合凝集素。

3. CsMBL1基因提高柑橘抗溃疡病的方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)克隆柑橘CsMBL1编码序列,所述CsMBL1编码序列如SEQ ID No. 1所示;

(2)构建CsMBL1过表达载体;

(3)CsMBL1过表达载体转化柑橘,培育后,得到溃疡病抗性提高的转基因植株。

4.根据权利要求3所述的CsMBL1基因提高柑橘抗溃疡病的方法,其特征在于,步骤(1)中,柑橘CsMBL1编码序列的克隆方法为:提取柑橘总RNA,反转录为cDNA作为模板,利用引物OE‑CsMBL1‑F和OE‑CsMBL1‑R进行PCR扩增并回收CsMBL1编码序列DNA片段,其中,引物OE‑CsMBL1‑F和OE‑CsMBL1‑R分别为SEQ ID No. 2和SEQ ID No. 3所示的核苷酸序列。

5.根据权利要求3所述的CsMBL1基因提高柑橘抗溃疡病的方法,其特征在于,步骤(2)中,CsMBL1过表达载体的构建方法为:KpnⅠ和EcoRⅠ酶切回收的CsMBL1编码序列DNA片段,连接到KpnⅠ和EcoRⅠ酶切回收的pLGNe载体上,构建过表达载体pLGNe‑CsMBL1。

6.根据权利要求3所述的CsMBL1基因提高柑橘抗溃疡病的方法,其特征在于,步骤(3)中,CsMBL1过表达载体转化柑橘的方法为:过表达载体pLGNe‑CsMBL1通过电击法转化根癌农杆菌,再用根癌农杆菌介导转化柑橘外植体。

7.根据权利要求6所述的CsMBL1基因提高柑橘抗溃疡病的方法,其特征在于,所述转化后的柑橘外植体细胞还经GUS染色鉴定、PCR鉴定和qRT‑PCR分析CsMBL1表达量后得到转基因植株。

8.根据权利要求7所述的CsMBL1基因提高柑橘抗溃疡病的方法,其特征在于,所述PCR鉴定转基因植株的引物为:ID‑CsMBL1‑F和ID‑CsMBL1‑R,所述ID‑CsMBL1‑F是根据CsMBL1基因前端序列设计,所述ID‑CsMBL1‑R是取自pLGNe载体上CaMV 35S的一段序列,所述ID‑CsMBL1‑F和ID‑CsMBL1‑R分别为SEQ ID No. 4和SEQ ID No. 5所示的核苷酸序列。

9.根据权利要求7所述的CsMBL1基因提高柑橘抗溃疡病的方法,其特征在于,所述qRT‑PCR分析CsMBL1表达量的引物为:RT‑CsMBL1‑F和RT‑CsMBL1‑R,所述RT‑CsMBL1‑F和RT‑CsMBL1‑R分别为SEQIDNo.6和SEQIDNo. 7所示的核苷酸序列。

10.根据权利要求3或7所述的CsMBL1基因提高柑橘抗溃疡病的方法,其特征在于,所述转基因植株还进行了抗性评价,判定CsMBL1过表达提高了柑橘对溃疡病抗性。