1. 一种酶解耦合超声辅助低共熔溶剂提取油茶饼粕中茶皂素的方法,其特征在于,包括如下步骤:S01、油茶饼粕的预处理,获得干燥的油茶饼粕粉末;
S02、配置纤维素酶和果胶酶的酶液,利用纤维素酶和果胶酶对油茶饼粕粉末进行酶解;
S03、制备低共熔溶剂;
S04、超声辅助低共熔溶剂提取油茶饼粕中的茶皂素,得到油茶饼粕茶皂素提取液;
S05、使用香兰素‑硫酸法测定油茶饼粕茶皂素提取液中的茶皂素含量;
S06、利用大孔树脂将茶皂素提取液富集得到油茶饼粕提取物,利用硅胶柱、ODS柱、薄层色谱法对其分离纯化得到茶皂素单体。
2. 根据权利要求1所述的一种酶解耦合超声辅助低共熔溶剂提取油茶饼粕中茶皂素的方法,其特征在于,步骤S01中, 将油茶饼粕烘干,使用粉碎机充分粉碎后,过60‑70目筛,干燥保存。
3. 根据权利要求1所述的一种酶解耦合超声辅助低共熔溶剂提取油茶饼粕中茶皂素的方法,其特征在于,步骤S02中, 纤维素酶和果胶酶分别溶于pH=5的PBS缓冲液中得到酶液,所述纤维素酶和果胶酶总酶液中纤维素酶占比为20%,酶解时间为2‑3h。
4. 根据权利要求1所述的一种酶解耦合超声辅助低共熔溶剂提取油茶饼粕中茶皂素的方法,其特征在于,步骤S03中, 所述的低共熔溶剂为由一定化学计量比的氢键受体和氢键供体组合而成的胆碱类低共熔溶剂,氢键受体为氯化胆碱,氢键供体为1,4‑丁二醇和1,
3‑丁二醇,具体为氯化胆碱、1,4‑丁二醇和1,3‑丁二醇三者按一定比例混合并加入一定比例的水在80 ‑85℃下加热搅拌合成至均一稳定的液体。
5. 根据权利要求4所述的一种酶解耦合超声辅助低共熔溶剂提取油茶饼粕中茶皂素的方法,其特征在于,步骤S04中, 具体工艺为:将所述低共熔溶剂加入到酶解后的油茶饼粕中,后置于超声清洗仪中,使用超声清洗仪对油茶饼粕茶皂素进行辅助提取,得到油茶饼粕茶皂素粗提液;最后,将油茶饼粕茶皂素粗提液进行高速离心处理,获得的上清液即为油茶饼粕茶皂素提取液,于2‑8 ℃下保存待用;其中,超声提取功率为240‑260 W,超声时间为
2 ‑3h,提取料液比1:20。
6.根据权利要求5所述的一种酶解耦合超声辅助低共熔溶剂提取油茶饼粕中茶皂素的方法,其特征在于,步骤S05中, 包括以下步骤:步骤5.1,称取100 mg茶皂素用80%乙醇溶解,定容至100 mL,分别吸取1.0,2.0,3.0,
4.0,5.0 mL至10mL容量瓶定容,,即得到浓度为100.0 μg/mL、200.0 μg/mL、300.0 μg/mL、
400.0 μg/mL及500.0 μg/mL的茶皂素标准系列溶液,于室温下保存待用;
步骤5.2,配置77%硫酸溶液和8%香兰素溶液:称取77 mL浓硫酸与23 mL去离子水混匀,于室温下保存待用;称取0.8 g香兰素,用无水乙醇定容至10 mL,现配现用;
步骤5.3,取0.5mL上述茶皂素标准溶液于具塞试管中,加入0.5 mL 8%香兰素溶液,将试管移入冰水混合物中,加入4 mL 77%浓硫酸;摇匀后,在60℃水浴中加热20 min,然后放入冰水中冷却10 min;以空白为对照,在550 nm波长下测定吸光度;
步骤5.4,以茶皂素浓度为横坐标,550 nm波长下吸光度为纵坐标,制作茶皂素浓度标2
准曲线,得到线性回归方程:y = 0.002x ‑ 0.0622,R = 0.9992;
步骤5.5,将步骤4中所得到的油茶饼粕茶皂素提取液稀释n倍,n取5‑10;将该溶液代替茶皂素标准溶液,按步骤5.3的步骤测定稀释的所述茶皂素提取液于550 nm波长下的吸光度值;
步骤5.6,根据步骤5.4得到的所述茶皂素标准溶液线性回归方程,计算油茶饼粕茶皂素提取液中茶皂素含量,公式如下:茶皂素含量(mg/g) = [ ( y + 0.0622) × V × n ] / (0.002× m ),其中,y为550 nm波长下的吸光度值,V为油茶饼粕茶皂素提取液体积(mL),n为油茶饼粕茶皂素提取液稀释倍数;0.0622为所述线性回归方程的截距,0.002为该方程的斜率,m为油茶饼粕粉末干重(g)。
7.一种酶解耦合超声辅助低共熔溶剂提取油茶饼粕中茶皂素的方法的优化方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤A:根据权利要求4‑6任意一项所述的酶解耦合超声辅助低共熔溶剂提取油茶饼粕中茶皂素的方法,筛选出6个影响茶皂素提取率的因素,具体为:用于提取的低共熔溶剂的种类、低共熔溶剂中氢键受体和氢键供体的摩尔比、1,3丁二醇和1,4丁二醇的比例、低共熔溶剂的含水量、纤维素酶和果胶酶总酶液中纤维素酶的占比、提取料液比;
步骤B:以油茶饼粕茶皂素提取液中茶皂素含量为指标,根据步骤A筛选出的6个所述因素进行单因素实验,确定最优的提取工艺因素参数。
8.根据权利要求7所述的一种酶解耦合超声辅助低共熔溶剂提取油茶饼粕中茶皂素的方法的优化方法,其特征在于,经过单因素实验得到最佳提取工艺条件为:低共熔溶剂中氢键受体和氢键供体的摩尔比1:4、1,4‑丁二醇和1,3‑丁二醇的摩尔比1:1、提取料液比1:
40g/mL、低共熔溶剂的含水量10%、纤维素酶和果胶酶液中纤维素酶占比20%。
9.一种用于油茶饼粕中茶皂素提取的低共熔溶剂,其特征在于,为由一定化学计量比的氢键受体和氢键供体组合而成的胆碱类低共熔溶剂,氢键受体为氯化胆碱,氢键供体为
1,4‑丁二醇和1,3‑丁二醇,具体为氯化胆碱、1,4‑丁二醇和1,3‑丁二醇三者按一定1:2:2的比例混合并加入10%的水在80 ‑85℃下加热搅拌合成至均一稳定的液体。