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专利号: 2024117673784
申请人: 西部(重庆)科学城种质创制大科学中心
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.CsACS6基因在提高柑橘溃疡病抗性中的应用,其特征在于,所述CsACS6基因编码序列如SEQ ID NO.1所示,所述应用的具体方法为:(1)克隆CsACS6编码序列;

(2)构建CsACS6过表达载体;

(3)CsACS6过表达载体转化柑橘,经鉴定得到溃疡病抗性提高的转基因植株。

2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,步骤(1)中,CsACS6编码序列的克隆方法为:提取柑橘总RNA,反转录为cDNA作为模板,利用引物OE‑CsACS6‑F和OE‑CsACS6‑R进行PCR扩增并回收CsACS6编码序列DNA片段;

引物OE‑CsACS6‑F和OE‑CsACS6‑R的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。

3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,步骤(2)中,CsACS6过表达载体为pLGNe‑CsACS6。

4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(2)中,CsACS6过表达载体的构建方法为:将KpnⅠ和SalI酶切回收的CsACS6编码序列DNA片段,连接到KpnⅠ和SalI酶切回收的pLGNe载体上,构建得到过表达载体pLGNe‑CsACS6。

5.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,步骤(3)中,CsACS6过表达载体转化柑橘的方法为:CsACS6过表达载体通过电击法转化根癌农杆菌,再用根癌农杆菌介导转化柑橘上胚轴,经GUS染色鉴定、PCR鉴定、qRT‑PCR分析CsACS6表达量后得到转基因植株。

6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,PCR鉴定转基因植株的引物为:ID‑CsACS6‑F和ID‑CsACS6‑R,核苷酸序列分别如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。

7.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,qRT‑PCR分析CsACS6表达量的引物为:RT‑CsACS6‑F和RT‑CsACS6‑R,核苷酸序列分别如SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示的。