1.CsERF39基因在提高柑橘抗溃疡病中的应用,其特征在于,所述CsERF39基因的核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示。
2.根据权利要求1所述的CsERF39基因在提高柑橘抗溃疡病中的应用,其特征在于,所述CsERF39基因的编码蛋白为柑橘乙烯响应因子。
3.CsERF39基因提高柑橘抗溃疡病的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)、克隆柑橘CsERF39编码序列,柑橘CsERF39编码序列如核苷酸序列SEQ ID NO:1所示;
(2)、构建CsERF39过表达载体;
(3)、CsERF39过表达载体转化柑橘,培育,得到转基因植株。
4.根据权利要求3所述的CsERF39基因提高柑橘抗溃疡病的方法,其特征在于,步骤(1)中克隆柑橘CsERF39编码序列的方法为:提取柑橘总RNA,反转录为cDNA,使用引物OE‑CsERF39‑F、OE‑CsERF39‑R和高保真酶进行PCR扩增并回收CsERF39编码序列DNA片段,其中,所述引物OE‑CsERF39‑F和OE‑CsERF39‑R分别具有SEQ ID No. 2和SEQ ID No. 3所示的核苷酸序列。
5.根据权利要求3所述的CsERF39基因提高柑橘抗溃疡病的方法,其特征在于,步骤(2)中构建CsERF39过表达载体的方法为:将CsERF39编码序列DNA片段和过表达载体pLGNe均用限制性内切酶KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切回收,并将双酶切回收的CsERF39编码序列DNA片段连接到双酶切回收的pLGNe载体上,构建过表达载体pLGNe‑CsERF39。
6.根据权利要求5所述的CsERF39基因提高柑橘抗溃疡病的方法,其特征在于,所述构建过表达载体pLGNe‑CsERF39具体是将双酶切回收的CsERF39编码序列DNA片段连接到双酶切回收的pLGNe载体上后的产物转化大肠杆菌DH5α,提取阳性克隆的质粒,得到过表达载体pLGNe‑CsERF39。
7.根据权利要求3所述的CsERF39基因提高柑橘抗溃疡病的方法,其特征在于,步骤(3)CsERF39过表达载体转化柑橘的方法为:过表达载体pLGNe‑CsERF39通过电击法转化根癌农杆菌,再用根癌农杆菌介导转化柑橘外植体。
8.根据权利要求3所述的CsERF39基因提高柑橘抗溃疡病的方法,其特征在于,步骤(3)在培育后,遗传转化后的外植体细胞还经GUS染色鉴定、PCR鉴定和qRT‑PCR分析CsERF39表达量;所述转基因植株还进行了抗性评价,判定CsERF39过表达提高了柑橘溃疡病抗性。
9.根据权利要求8所述的CsERF39基因提高柑橘抗溃疡病的方法,其特征在于,所述PCR鉴定转基因植株的引物为:ID‑CsERF39‑F和ID‑CsERF39‑R,所述ID‑CsERF39‑F和ID‑CsERF39‑R分别具有SEQ ID No. 4和SEQ ID No. 5所示的核苷酸序列。
10.根据权利要求8所述的CsERF39基因提高柑橘抗溃疡病的方法,其特征在于,所述qRT‑PCR分析CsERF39表达量的引物为:RT‑CsERF39‑F和RT‑CsERF39‑R,所述RT‑CsERF39‑F和RT‑CsERF39‑R分别具有SEQIDNo. 6和SEQIDNo. 7所示的核苷酸序列。