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专利号: 2024110092554
申请人: 浙江理工大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测半胱氨酸的荧光探针,其特征在于:其分子式为C20H16BF2N3S,简称BDP‑

4SPy,结构式为式(I)

2.根据权利要求1所述的一种检测半胱氨酸的荧光探针的制备方法,其特征在于,合成步骤如下:在氮气保护下,将7‑氯‑5,5‑二氟‑1,3‑二甲基‑5H‑4λ4,5λ4‑吡咯并[1',2':1,6][1,3,

2]二氮杂伯啉并[4,3‑a]异吲哚(1)和4‑巯基吡啶和三乙胺溶于无水二氯甲烷中,反应一定时间后得5,5‑二氟‑1,3‑二甲基‑7‑(吡啶‑4‑基硫)‑5H‑4λ4,5λ4‑吡咯并[1',2':1,6][1,3,

2]二氮杂喹啉并[4,3‑a]异吲哚,即:BDP‑4Spy;

探针的制备反应式如下:

3.根据权利要求2所述的一种检测半胱氨酸的荧光探针的制备方法,其特征在于:所述7‑氯‑5,5‑二氟‑1,3‑二甲基‑5H‑4λ4,5λ4‑吡咯并[1',2':1,6][1,3,2]二氮杂伯啉并[4,3‑a]异吲哚(1),4‑巯基吡啶(2)和三乙胺(3)的摩尔比为0.1 1:1:2 5;4‑巯基吡啶~ ~与无水二氯甲烷物质的量与体积比为40:(1‑100);反应温度为10 40度,反应时间为0.5 24~ ~小时。

4.根据权利要求2所述的一种检测半胱氨酸的荧光探针的制备方法,其特征在于:所述7‑氯‑5,5‑二氟‑1,3‑二甲基‑5H‑4λ4,5λ4‑吡咯并[1',2':1,6][1,3,2]二氮杂伯啉并[4,3‑a]异吲哚(1),4‑巯基吡啶(2)和三乙胺(3)的摩尔比为1:1:3;4‑巯基吡啶与无水二氯甲烷物质的量与体积比为1:12;反应温度为25度,反应时间为2小时。

5.一种检测半胱氨酸的荧光探针的使用方法;其特征在于:向同浓度的式(I)所示化合物的磷酸缓‑乙醇冲溶液中加入不同浓度半胱氨酸,其中PBS:EtOH=7:3,配置至少5种不同半胱氨酸含量的含有式(I)所示化合物的标准溶液;

所示标准溶液中式(I)所示化合物的浓度为1 nM 10 μM;

~

所示标准溶液中半胱氨酸的含量为0.1 nM 1 mM;

~

分别测定所述标准溶液的荧光发射光谱,激发波长为500 nm,以半胱氨酸浓度为横坐标,以I550/I590为纵坐标,建立标准曲线;

I550表示所述标准溶液在波长为550 nm处的荧光发射峰强度值,I590表示所述标准溶液在波长为590 nm处的荧光发射峰强度值,I550/I590是波长为550 nm处的荧光发射峰强度值与波长为590 nm处的荧光发射峰强度值之比;

向待测样品中加入式(I)所示化合物,控制其浓度与所述标准溶液中式(I)所示化合物的浓度相等;测定其在激发波长为500 nm的激发光下的荧光发射光谱,即根据标准曲线计算得出待测样品的半胱氨酸含量。