1.一种荧光增敏型荧光探针的制备方法,其特征在于:在无水DMF中依次加入羟基化四苯乙烯、4‑氯‑7‑硝基苯并呋咱、三乙胺,室温条件下搅拌反应1.5 2.5 h,然后将混合溶液~加入冰水中产生沉淀,将其进行过滤,滤饼用无水甲醇洗涤,得到淡黄色固体,真空干燥后得产物;
所述羟基化四苯乙烯为TPE‑OH、TPE‑2OH或TPE‑4OH;其中TPE‑OH的结构式为: ,得到对应的产物TPE‑NBD的结构式为: ;TPE‑2OH的结构式为: ,得到对应的产物TPE‑2NBD的结构式为: ;
TPE‑4OH的结构式为: ,得到对应的产物TPE‑4NBD的结构式为:。
2.如权利要求1所述的一种荧光增敏型荧光探针的制备方法,其特征在于:羟基化四苯乙烯与4‑氯‑7‑硝基苯并呋咱的摩尔比为1:1 1:2。
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3.如权利要求1所述的方法制备的荧光增敏型荧光探针在检测半胱氨酸和同型半胱氨酸中的应用,其特征在于:荧光探针选择性识别半胱氨酸和同型半胱氨酸;半胱氨酸和同型半胱氨酸的检测方法:在荧光探针TPE‑NBD的THF溶液、TPE‑2NBD的乙腈溶液或TPE‑4NBD的DMF溶液中分别加入谷氨酸、精氨酸、甘氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、半胱氨酸、同型半胱氨酸、天冬氨酸、谷胱甘肽、酪氨酸、丙氨基酸、谷氨酰胺、组氨酸、异亮氨酸、天冬酰胺、瓜氨酸、脯氨酸、丝氨酸、缬氨酸溶液,只有半胱氨酸和同型半胱氨酸能使探针溶液的荧光显著增强。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于:荧光探针定量检测半胱氨酸和同型半胱氨酸,线性关系如下:‑5 ‑5
定量检测半胱氨酸:在0.1×10 ‑0.8×10 M浓度范围内,TPE‑NBD的荧光强度与半胱2
氨酸的浓度呈线性相关,线性方程为y=229.2365+156.3414x,相关系数R =0.99106,检出限‑8 ‑5 为8.8×10 M;在0‑6×10 M浓度范围内,TPE‑2NBD的荧光强度与半胱氨酸的浓度呈线性相‑8关,线性方程为y=774.6231+232.3015x,相关系数为0.9940,检出限为5.5×10 M;在0‑6×‑5
10 M浓度范围内,TPE‑4NBD的荧光强度与半胱氨酸的浓度呈线性相关,线性方程为y=‑9
1179.0341+351.2365x,相关系数为0.9985,检出限为3.9×10 M;其中,x为半胱氨酸的浓度,单位M,y为荧光强度;
‑5 ‑5
定量检测同型半胱氨酸:在0.1×10 ‑0.8×10 M浓度范围内,TPE‑NBD的荧光强度与2
同型半胱氨酸的浓度呈线性相关,线性方程为y=357.37561+130.4390x,相关系数R =‑8 ‑5
0.99609,检出限为9×10 M;在0‑1×10 M浓度范围内,TPE‑2NBD的荧光强度与同型半胱氨酸的浓度呈线性相关,线性方程为y=227.6750+213.3156x,相关系数为0.9961,5.8×10‑8 ‑5M;在0‑1×10 M浓度范围内,TPE‑4NBD的荧光强度与同型半胱氨酸的浓度呈线性相关,‑9 线性方程为y=505.0795+439.6451x ,相关系数为0.9942,检出限为3.8×10 M;其中,x为同型半胱氨酸的浓度,单位M,y为荧光强度。