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专利号: 2024108069615
申请人: 烟台大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种加氢响应辅酶NAD(P)H荧光探针,其特征在于,所述加氢响应辅酶NAD(P)H荧光探针的结构如式1所示:式1。

2.一种权利要求1所述加氢响应辅酶NAD(P)H荧光探针的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)3‑溴‑7H‑苯并[d]苯并[4,5]咪唑并[2,1‑a]异喹啉‑7‑酮的制备:将4‑溴‑1,8‑萘二甲酸酐和邻苯二胺溶解于冰乙酸中,加热回流反应,反应结束后,将液冷却至室温,过滤收集固体得到中间化合物3‑溴‑7H‑苯并[d]苯并[4,5]咪唑并[2,1‑a]异喹啉‑7‑酮粗产品;接着将所收集固体粗产品转移至碳酸氢钠饱和水溶液中,并继续过滤,所得固体依次用去离子水和分析纯级的乙醇冲洗,得到纯亮黄色固体3‑溴‑7H‑苯并[d]苯并[4,5]咪唑并[2,1‑a]异喹啉‑7‑酮;

(2)3‑(2‑(甲基氨基)乙基)氨基)‑7H‑苯并[d]苯并[4,5]咪唑并[2,1‑a]异喹啉‑7‑酮的制备:将上述得到的3‑溴‑7H‑苯并[d]苯并[4,5]咪唑并[2,1‑a]异喹啉‑7‑酮溶解于乙二醇单乙醚溶剂中,接着加入过量的化合物N‑甲基乙烷‑1,2‑二胺,回流反应;反应结束后,将反应液冷却至室温,接着加入适量的冰水,并用二氯甲烷萃取,收集有机相,减压蒸馏除去有机溶剂得到中间产物3‑(2‑(甲基氨基)乙基)氨基)‑7H‑苯并[d]苯并[4,5]咪唑并[2,1‑a]异喹啉‑7‑酮的粗产品,所得粗产品进一步用柱色谱分离提纯,得到纯的中间产物3‑(2‑(甲基氨基)乙基)氨基)‑7H‑苯并[d]苯并[4,5]咪唑并[2,1‑a]异喹啉‑7‑酮;

(3)加氢响应辅酶NAD(P)H荧光探针的制备:

将3‑(2‑(甲基氨基)乙基)氨基)‑7H‑苯并[d]苯并[4,5]咪唑并[2,1‑a]异喹啉‑7‑酮和

2‑甲基‑2‑(2,4,5‑三甲基‑3,6‑二氧代环己基‑1,4‑二烯‑1‑基)丙酸、EDCI、HOBT溶解在干燥的Et3N溶剂和DMF溶剂中,避光、氮气保护条件下反应;反应完成后,相反应液中加入适量冰水,接着用二氯甲烷萃取,收集有机相,用无水硫酸钠进行干燥,接着减压蒸馏出去有机溶剂得到加氢响应辅酶NAD(P)H荧光粗产品;所得到的粗产品进一步用柱色谱分离提纯,得到纯的红色粉末状加氢响应辅酶NAD(P)H荧光探针。

3.根据权利要求2所述加氢响应辅酶NADPH荧光探针的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述4‑溴‑1,8‑萘二甲酸酐和邻苯二胺的摩尔比为1:1 5,邻苯二胺与冰乙酸的摩尔体积~比为1mmol:10 100mL;反应温度为100 120℃,反应时间为3 24 h。

~ ~ ~

4.根据权利要求2所述加氢响应辅酶NADPH荧光探针的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所述3‑溴‑7H‑苯并[d]苯并[4,5]咪唑并[2,1‑a]异喹啉‑7‑酮与N‑甲基乙烷‑1, 2‑二胺的摩尔比为1:1 5;所述3‑溴‑7H‑苯并[d]苯并[4,5]咪唑并[2,1‑a]异喹啉‑7‑酮与乙二醇~单乙醚的摩尔体积比为1 mmol:5 20mL;回流反应时间为5 10 h,温度为100 150℃,回流反~ ~ ~应条件为避光;色谱柱分离的条件为:硅胶柱色谱,流动相为甲醇:二氯甲烷=1:5。

5.根据权利要求2所述加氢响应辅酶NADPH荧光探针的制备方法,其特征在于,步骤(3)中所述3‑(2‑(甲基氨基)乙基)氨基)‑7H‑苯并[d]苯并[4,5]咪唑并[2,1‑a]异喹啉‑7‑酮、

2‑甲基‑2‑(2,4,5‑三甲基‑3,6‑二氧代环己基‑1,4‑二烯‑1‑基)丙酸、Et3N、EDCI、HOBT的摩尔比为1 : 1 2 : 2 4 : 2 4,所述反应的时间为5 24 h;所述二氯甲烷萃取的次数为2 5~ ~ ~ ~ ~次;所述柱色谱提纯的条件为:硅胶柱色谱,流动相为甲醇:二氯甲烷 =1:10。

6.一种加氢响应辅酶NAD(P)H荧光传感器,其特征在于,所述加氢响应辅酶NAD(P)H荧光传感器由权利要求1所述加氢响应辅酶NAD(P)H荧光探针与催化剂联合制备而成;

所述催化剂为2‑吡啶苯酰胺五甲基环戊二烯基有机铱催化剂,其结构为:

。

7.一种权利要求6所述加氢响应辅酶NAD(P)H荧光传感器在制备细胞内加氢响应辅酶NAD(P)H荧光成像分析试剂中的应用。