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专利号: 2024100863955
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种用于抗体纯化层析介质的羟乙基壳聚糖凝胶微球,其特征在于,所述羟乙基壳聚糖凝胶微球按如下方法制备:(1)凝胶微球:在40‑60℃、100‑500r/min搅拌条件下,将羟乙基壳聚糖水溶液分散于含有交联剂和Span 80的液体石蜡中,40‑60℃、100‑500r/min反应1‑5h,升温至60‑100℃、

100‑500r/min反应2‑8h,过滤,滤饼用有机溶剂浸泡,后使用体积浓度10‑60%有机溶剂水溶液淋洗,最后真空干燥,得到凝胶微球;所述交联剂包括戊二醛、环氧氯丙烷、N,N‑亚甲基双丙烯酰胺中的一种;

(2)活化凝胶微球:将步骤(1)凝胶微球加入二甲基亚砜水溶液中,再加入烯丙基溴和NaOH,在20‑40℃条件下反应12‑24h,反应后的凝胶微球与N‑溴代琥珀酰亚胺和体积浓度

30‑70%丙酮水溶液在20‑40℃条件下反应1‑5h,过滤,滤饼清洗,获得活化后的凝胶微球;

(3)连接功能配基:步骤(2)活化后的凝胶微球在碳酸盐缓冲液中与2‑巯基‑1‑甲基咪唑在20‑40℃条件下反应10‑20h,清洗后,得到羟乙基壳聚糖凝胶微球。

2.如权利要求1所述的羟乙基壳聚糖凝胶微球,其特征在于,步骤(1)中羟乙基壳聚糖水溶液质量浓度为1‑8%,所述交联剂与羟乙基壳聚糖水溶液体积比为0.1‑1:1,所述液体石蜡与羟乙基壳聚糖水溶液体积比为1‑10:1,所述Span 80与羟乙基壳聚糖质量比为2‑6:

1。

3.如权利要求1所述的羟乙基壳聚糖凝胶微球,其特征在于,步骤(1)浸泡用有机溶剂包括甲醇、乙醇、石油醚、丙酮中的一种;所述淋洗所用的10‑60%有机溶剂水溶液中有机溶剂包括甲醇、乙醇、石油醚、丙酮中的一种。

4.如权利要求1所述的羟乙基壳聚糖凝胶微球,其特征在于,步骤(2)二甲基亚砜水溶液体积浓度20‑50%,所述二甲基亚砜水溶液体积用量以凝胶微球质量计为0.5‑2mL/g;烯丙基溴体积用量以凝胶微球质量计为0.1‑1mL/g;NaOH与凝胶微球质量比为0.1‑1:1;N‑溴代琥珀酰亚胺与凝胶微球质量比为0.1‑1:1;30‑70%丙酮水溶液体积用量以凝胶微球质量计为0.5‑2mL/g。

5.如权利要求1所述的羟乙基壳聚糖凝胶微球,其特征在于,步骤(2)滤饼清洗是指分别使用体积浓度50%丙酮水溶液、体积浓度50%乙醇水溶液和去离子水清洗。

6.如权利要求1所述的羟乙基壳聚糖凝胶微球,其特征在于,步骤(3)碳酸盐缓冲液体积用量以步骤(2)凝胶微球质量计为1‑5mL/g;2‑巯基‑1‑甲基咪唑与步骤(2)凝胶微球质量比为0.01‑1:1。

7.一种权利要求1所述羟乙基壳聚糖微球作为抗体纯化层析介质的应用。

8.如权利要求7所述的应用,其特征在于,所述抗体包括牛免疫球蛋白。