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专利号: 2023118047853
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种 CsMEK5基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用,其特征在于,所述CsMEK5 基因的核苷酸序列如 SEQ ID No. 1 所示。

2.根据权利要求 1 所述的 CsMEK5 基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用,其 特征在于,所述 CsMEK5 基因的编码蛋白的氨基酸序列如 SEQ ID No. 2 所示。

3.根据权利要求 1 或 2 所述的 CsMEK5 基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用, 其特征在于,将所述 CsMEK5 基因进行克隆,构建超量表达载体; 将超量表达载体转化柑橘,得到溃疡病抗性提高的转基因植株。

4.根据权利要求 3 所述的 CsMEK5 基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用,其 特征在于,所述克隆采用 PCR 扩增,正向引物的核苷酸序列如 SEQ ID No. 3 所示,反向引物 的核苷酸序列如 SEQ ID No.4 所示。

5.根据权利要求 3 所述的 CsMEK5 基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用,其 特征在于,所述克隆具体为:提取柑橘的总 RNA,然后反转录为 cDNA,最后采用高保真酶 PCR 扩增 CsMEK5 基因 编码序列 DNA 片段。

6.根据权利要求 3 所述的 CsMEK5 基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用,其 特征在于,所述构建超量表达载体具体为:以带有 CaMV 35S 启动子的 pNmGFPer 为载体;其中:CaMV 35S 启动子的核苷酸序列 如 SEQ ID NO. 5 所示;

利用限制性内切酶对扩增后所得 CsMEK5 基因编码序列 DNA 片段,最后连接至采用相 同限制性内切酶酶切的载体上。

7.根据权利要求 3 所述的 CsMEK5 基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用,其 特征在于,所述应用还包括对所述转基因植株进行抗性评价。

8.根据权利要求 7 所述的 CsMEK5 基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用,其 特征在于,所述抗性评价具体采用 PCR 扩增,正向引物的核苷酸序列如 SEQ ID No.6 所示,反向引物的核苷酸序列如 SEQ ID No.7 所示。

9.根据权利要求 8 所述的 CsMEK5 基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用,其 特征在于,在 PCR 扩增完成后还包括实时荧光定量 PCR 扩增进行 CsMEK5 基因表达量检测, 正向引物的核苷酸序列如 SEQ ID No.8 所示,反向引物的核苷酸序列如 SEQ ID No.9 所示; 优选地,荧光定量 PCR 扩增中的内参基因为柑橘 Actin 基因,正向引物的核苷酸序列如 SEQ ID No.10 所示,反向引物的核苷酸序列如 SEQ ID No.11 所示。