1.CsLYK基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用,其特征在于,所述CsLYK基因的编码蛋白为柑橘LysM类受体蛋白磷酸激酶,命名为CsLYK蛋白,CsLYK基因的核苷酸序列为(a1)或(a2):(a1)SEQ ID No.1所示核苷酸序列;
(a2)来源于柑橘且与(a1)具有95%以上同一性且编码所述CsLYK蛋白的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的CsLYK基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用,其特征在于,所述CsLYK蛋白为(b1)或(b2)或(b3)或(b4):(b1)氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的蛋白质;
(b2)在(b1)所述蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白;
(b3)将(b1)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与柑橘细菌性溃疡病抗病性相关的蛋白质;
(b4)来源于柑橘且与(b1)具有98%以上同一性且与柑橘溃疡病抗病性相关的蛋白质。
3.根据权利要求1所述的CsLYK基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用,其特征在于,包括以下步骤:(1)克隆柑橘CsLYK编码序列,然后进行超量表达载体构建;
(2)超量表达载体转化柑橘,得到溃疡病抗性提高的转基因植株。
4.根据权利要求3所述的CsLYK基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用,其特征在于,步骤(1)中,克隆柑橘CsLYK基因编码序列所采用的PCR引物为OE-F和OE-R,分别具有如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示核苷酸序列。
5.根据权利要求3所述的CsLYK基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用,其特征在于,步骤(1)中,柑橘CsLYK基因编码序列的克隆方法为:提取柑橘总RNA,然后反转录为cDNA,最后采用高保真酶PCR扩增CsLYK基因编码序列DNA片段。
6.根据权利要求3所述的CsLYK基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用,其特征在于,步骤(1)中,超量表达载体构建方法为:以pLGNe为载体,pLGNe载体带有CaMV35S启动子,CaMV 35S启动子为花菜花叶病毒启动子,具有SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列,利用KpnⅠ和EcoRⅠ酶切目的片段后连接到KpnⅠ和EcoRⅠ酶切回收的载体上,构建超量表达载体pLGNe-LYK。
7.根据权利要求3所述的CsLYK基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用,其特征在于,步骤(2)中,超量表达载体转化柑橘的方法为:超量表达载体通过电击法转化根癌农杆菌,再用根癌农杆菌介导转化柑橘外植体,遗传转化后的外植体细胞经离体培养、染色鉴定、嫁接后得到转基因植株。
8.根据权利要求3所述的CsLYK基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用,其特征在于,步骤(2)得到转基因植株后,对转基因植株进行抗性评价。
9.根据权利要求8所述的CsLYK基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用,其特征在于,对转基因植株进行抗性评价前,通过PCR验证转基因植株,采用的引物为ID-F和ID-R,ID-F是取自pLGNe载体上CaMV 35S的一段序列,ID-R是根据CsLYK基因末端序列设计,分别具有如SEQ ID No.6和SEQ ID No.7所示核苷酸序列。
10.根据权利要求8所述的CsLYK基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用,其特征在于,PCR验证后,利用实时荧光定量PCR进行CsLYK基因表达量检测,采用的引物为RT-F和RT-R,分别具有如SEQ ID No.8和SEQ ID No.9所示核苷酸序列,实时荧光定量PCR内参为柑橘Actin基因,采用引物为AC-F和AC-R,分别具有如SEQ ID No.10和SEQ ID No.11所示核苷酸序列。