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专利号: 2023117679127
申请人: 吉林省特医食品生物科技有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-27
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种葵花盘脂质体在制备降低高尿酸血症引起的炎症反应的产品中的应用;

所述葵花盘脂质体的制备方法包括:

称取大豆卵磷脂、胆固醇和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺甲氧基聚乙二醇于250 mL单口圆底烧瓶中,加入二氯甲烷使固体全部溶解;

再加入含有二茂铁葵花盘肽、葵花盘总生物碱和葵花盘总黄酮的甲醇溶液,超声30 s使其混合均匀;

随后,将烧瓶连接至旋转蒸发器,真空状态下于42℃水浴中使二氯甲烷‑甲醇溶液完全蒸发从而在烧瓶壁上形成一层均匀带有折光的黄色磷脂膜;以及取下烧瓶,加入8 mL无菌的pH 7.4 的PBS溶液,于超声波清洗器中分离磷脂薄膜,再将烧瓶转至超声波细胞破碎仪中用300 W超声10 min从而使磷脂膜自组装成葵花盘脂质体;

其中,所述二茂铁葵花盘肽的制备方法包括:对葵花盘肽的氨基进行保护;将氨基二茂铁与氨基保护的葵花盘肽反应形成叔丁基氧‑葵花盘肽‑二茂铁;再对其进行酸水解可得二茂铁修饰的葵花盘肽;其中,所述葵花盘肽为氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的PDP‑9,或氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的PDP‑17;

其中,“对葵花盘肽的氨基进行保护”的步骤具体包括:

配制得到碳酸氢钠的饱和溶液,与溶解有二碳酸二叔丁酯的二氧六环溶液混合;然后少量多次加入葵花盘肽以上混合液,TLC跟踪反应进程;

反应过夜后,用乙酸乙酯洗2‑3次;

取水相用乙酸乙酯洗2次;用饱和碳酸氢钠洗油相2次;

然后混合所有的水相用10%的盐酸调节水相的pH=1,再用乙酸乙酯洗水相2次;集中以上油相用无水硫酸钠干燥,过滤,蒸干即可得到晶体产物;

其中,“将氨基二茂铁与氨基保护的葵花盘肽反应形成叔丁基氧‑葵花盘肽‑二茂铁”的步骤包括:用无水二氯甲烷将上述得到的氨基保护的葵花盘肽溶解于干燥的圆底烧瓶中,于0℃下加入三乙胺,再加入苯并三唑‑1‑四甲基六氟磷酸反应1小时后;

加入氨基‑二茂铁,反应2h后移入室温反应,过夜反应,TLC跟踪反应进程;

反应结束后,分别依次用饱和碳酸氢钠溶液、0.5M盐酸、0.5M碳酸氢钠溶液和水洗涤,最后用无水硫酸钠干燥油相,过滤,蒸干得到固体;

用二氯甲烷和乙醇将固体溶解,以二氯甲烷和乙醇的体积比95:5的混合溶液为淋洗液过层析柱,收集组分,干燥,得纯化的叔丁基氧‑葵花盘肽‑二茂铁固体;

其中,“酸水解”的步骤具体包括:

将叔丁基氧‑葵花盘肽‑二茂铁溶于乙酸乙酯溶液中,然后在0℃通干燥的HCl气体1h,再在室温下反应0.5h,最后蒸干即可;

用甲醇将固体溶解,用乙醚反复重结晶多次,得比较纯的二茂铁葵花盘肽。

2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述葵花盘总生物碱和葵花盘总黄酮的提取方法包括:取葵花盘粉颗粒用10倍质量的50%乙醇回流提取1次,提取15min,过滤,滤液减压浓缩到葵花盘粉质量的0.5倍,即得醇提液;

将已预处理好的D001大孔树脂1000mL,装入内径为60mm,高为1200mm的玻璃柱,加入上述提取所得的醇提液,缓慢充分吸附后,以5倍柱体积的蒸馏水,4BV/h的流速洗去水溶性杂质;

再用5BV50%乙醇以1BV/h的流速洗脱,收集洗脱液Ⅰ,再用5BV氨水含量为1%的50%乙醇以1BV/h的流速洗脱,收集洗脱液Ⅱ;

洗脱液Ⅰ浓缩干燥后即得葵花盘总黄酮,洗脱液Ⅱ浓缩干燥后即得葵花盘总生物碱。