1.一种双酶型免疫荧光系统检测痕量黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)磁性Fe3O4纳米粒子MNPs制备：将1.625g FeCl3·6H2O和0.60g Na3Cit·2H2O溶于

40mL乙二醇中，搅拌2h后，得到棕红色透明溶液；将10mL透明的乙二醇和3gNaAc的混合液滴加到棕红色透明溶液中，在室温下猛烈搅拌40min，得到均匀的前驱体溶液；然后将均匀的前驱体溶液密封在100mL特氟龙衬里的不锈钢高压釜中，200℃恒温反应10小时，冷却至室温后，用外加磁铁分离黑色产物，用乙醇和去离子水洗涤三次，然后将固体在60℃真空干燥

12h后，得到表面具有羧基基团的磁性Fe3O4纳米粒子MNPs；

(2)MNPs‑PEG‑Apt的制备：将步骤（1）所得表面具有羧基基团的磁性Fe3O4纳米粒子MNPs分散于PBS缓冲液中，制备为1mg/mL、pH=6的羧基化的MNPs溶液；取10mL羧基化的MNPs溶液，再加入2.9mgEDC和3.25mgNHSS，室温下振荡器活化1h，转速为150rpm/min；在外加磁场的作用下分离MNPs，并用PBS缓冲液洗涤三次，得到活化MNPs；将得到的活化MNPs分散在10mLPBS缓冲液中，加入45mg的PEG，所述PEG一端为氨基，另一端为羧基，室温下振荡三小时，在外部磁场的作用下洗涤三次，得到MNPs‑PEG；将MNPs‑PEG重新分散在10mL的PBS缓冲溶液中，加入2.9mgEDC和3.25mgNHSS，1h后分离MNPs‑PEG并洗涤，得到活化MNPs‑PEG；再将活化MNPs‑PEG分散在10mLPBS缓冲溶液中，将预先在95℃加热5min并在4℃下冷却10min的5μM的Apt加入到活化MNPs‑PEG的PBS缓冲溶液中，并在37℃下恒温振荡3h，再加入质量浓度为2％牛血清白蛋白封闭1h；反应结束后，用pH=7.2的PBS缓冲溶液洗涤三次，将所得的MNPs‑PEG‑Apt分散在10mLPBS缓冲溶液中，并在4℃避光储存，备用；所述Apt的核酸序列为：NH2‑GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCC；

(3)AFB1‑COD偶联物溶液的制备：将1mg的AFB1和2mg的CMO溶于2mL吡啶中，将混合物涡旋并在室温下避光孵育24小时；用氮气除去吡啶后，得到肟化产物AFB1‑肟，将AFB1‑肟溶于

1mL、pH=8.0的超纯水中，用1mol/LHCl将溶液调节至pH=2.0，并在4°C下放置15分钟静置沉淀；通过离心收集沉淀物，并用0.5mL氯仿和0.5mL乙酸乙酯的混合液重复提取五次，将提取后的氯仿和乙酸乙酯与5mL、pH=2.0超纯水混合并放置过夜；通过氮气干燥收集提取的AFB1‑肟；然后，将721μgAFB1‑肟、1.1mgNHS和11mgDCC溶于1mL无水THF中，并在室温下避光振荡1h；通过离心去除沉淀物，同时在55°C的水浴中用氮气干燥上清液，得到AFB1的酯化产物AFB1‑酯，并将AFB1‑酯溶解在DMF中，使AFB1‑酯类的最终浓度为1mg/mL；按照1:1的摩尔比将AFB1‑酯溶液逐滴加入COD溶液中，在4℃下持续振荡4小时后，用PBS缓冲液透析48小时，然后用PBS定容至10 mL,得到AFB1‑COD偶联物溶液，储存在4℃下以备进一步使用；

(4)制作标准曲线：将步骤（3）得到的AFB1‑COD偶联物溶液稀释后使用，取100μL MNPs‑PEG‑Apt加入到500μLAFB1‑COD偶联物稀释液中得到混合溶液，将50μL一系列不同浓度的AFB1标准溶液分别加入到上述混合溶液中，室温振荡竞争40min，取250μL的上清液加入250μL3.63fM/L的胆碱并振荡均匀，调节体系pH为12.13，室温下静置孵育20min；孵育完成后取

100μL该溶液加入到由200μL 50μM/L ADHP和200μL 0.025μM/L HRP组成的发光溶液中，在

40℃下恒温孵育35min后用荧光分光光度计扫描光谱图，激发波长为535nm，观察585nm处的荧光光谱的峰值变化；以AFB1的浓度为横坐标，585nm处的荧光强度为纵坐标绘制出标准曲线；

(5)样品中黄曲霉素的提取与检测：称取5g待测样品于50mL离心管中，加入20 mL甲醇的水溶液，涡旋混匀，置于摇床中振荡20min，在6000rmp/min下离心10min，用旋转蒸发仪将上清液蒸发至干燥，用1mL质量浓度为70％甲醇配制成溶液，过0.22μm滤膜，并在氮气气流下，50℃蒸发至干燥；将干燥的实际样品中加入100μLMNPs‑PEG‑Apt和500μLAFB1‑COD偶联物稀释液，室温下振荡竞争40min，取250μL的上清液加入250μL3.63fM/L的胆碱并振荡均匀，调节体系pH为12.13，室温下静置孵育20min；孵育完成后取100μL该溶液加入到由200μL50μM/LADHP和200μL 0.025μM/LHRP组成的发光溶液中，在40℃下恒温孵育35min后用荧光分光光度计扫描光谱图，激发波长为535nm，观察585nm处的荧光光谱的峰值，带入标准曲线，得到黄曲霉素浓度数值；步骤（4）和（5）中AFB1‑COD偶联物稀释液的浓度为3.0μg/mL。

2.根据权利要求1所述双酶型免疫荧光系统检测痕量黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，步骤（5）待测样品为花生。

3.根据权利要求1所述双酶型免疫荧光系统检测痕量黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，步骤（5）甲醇的水溶液中甲醇和水的体积比为7:3。