利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2023111046031
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种醇脱氢酶突变体,其特征在于,所述醇脱氢酶突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第114位酪氨酸突变为色氨酸获得的。

2.一种权利要求1所述醇脱氢酶突变体的编码基因。

3.一种含权利要求2所编码基因的重组载体。

4.一种由权利要求3所述重组载体构建的重组基因工程菌。

5.一种权利要求1所述醇脱氢酶突变体在催化糠醛合成糠醇中的应用。

6.如权利要求5所述的应用,其特征在于,所述应用为:将含醇脱氢酶突变体编码基因的工程菌经诱导表达获得的湿菌体为催化剂,以糠醛为底物,加入NADH、辅助酶和辅底物,以pH 4‑9缓冲液为反应介质构成反应体系,在20‑50℃、500‑800rpm条件下反应完全后,获得含糠醇反应液,反应液分离纯化获得糠醇;所述辅助酶包括葡萄糖脱氢酶、异丙醇脱氢酶、甲酸脱氢酶;所述辅底物包括葡萄糖、异丙醇、甲酸钠。

7.如权利要求6所述的应用,其特征在于,所述反应体系中,催化剂用量以湿菌体计20‑

100g/L,所述底糠醛酸加入量为300‑500mM,NADH加入量为0.1‑0.5mM;辅底物与底物浓度比为1:1。

8.如权利要求6所述的应用,其特征在于,所述葡萄糖脱氢酶、异丙醇脱氢酶、甲酸脱氢酶各自以含相应编码基因工程菌经发酵培养获得湿菌体形式加入,所述湿菌体加入量均为

20‑100g/L。

9.如权利要求8所述的应用,其特征在于,所述葡萄糖脱氢酶、异丙醇脱氢酶、甲酸脱氢酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.9。

10.如权利要求6所述的应用,其特征在于,将含醇脱氢酶突变体编码基因的工程菌接种至含100μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,37℃、200rpm培养8‑12h,获得种子液;将种子液以体积浓度2%的接种量接种至新鲜的含100μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,37℃、

200rpm培养至OD600为0.6~0.8,再加入终浓度为0.2mM的IPTG,24℃、200rpm诱导过夜,诱导培养液于4℃和8000rpm下离心10min,弃去上清液,收集湿菌体。