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专利号: 2022111096568
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种醇脱氢酶突变体,其特征在于,所述醇脱氢酶突变体是将SEQ ID No.2所示氨基酸序列突变为下列之一:(1)第73位甘氨酸突变为丙氨酸;(2)第73位甘氨酸突变为丙氨酸、第107位谷氨酸突变为丝氨酸、第175位甘氨酸突变为天冬氨酸;(3)第73位甘氨酸突变为丙氨酸、第107位谷氨酸突变为丝氨酸、第175位甘氨酸突变为天冬氨酸、第96位天冬氨酸突变为甘氨酸;(4)第73位甘氨酸突变为丙氨酸、第107位谷氨酸突变为丝氨酸、第175位甘氨酸突变为天冬氨酸、第96位天冬氨酸突变为甘氨酸、第286位缬氨酸突变为丙氨酸。

2.一种含权利要求1所述醇脱氢酶突变体的编码基因的重组基因工程菌。

3.一种权利要求1所述醇脱氢酶突变体在生物无机胺化反应中的应用,其特征在于,所述应用是:以含醇脱氢酶突变体基因和草铵膦脱氢酶基因的共表达重组菌经发酵培养获得+

的湿菌体为催化剂,以酮酸化合物为底物,加入异丙醇和NAD,以pH值为7‑8的缓冲液为反应介质构成反应体系,在35℃‑60℃、500‑600rpm条件下反应,反应完全,将反应液分离纯化,获得对应的手性化合物;所述底物为2‑羰基‑4‑(羟基甲基膦酰基)丁酸、α‑酮戊二酸、草酰乙酸;所述草铵膦脱氢酶基因核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于,所述含醇脱氢酶突变体基因和草铵膦脱氢酶基因的共表达重组菌是采用一步克隆法将醇脱氢酶突变体编码基因克隆到含草铵膦脱氢酶基因的pETDuet‑PPTDH载体的第二个多克隆位点上,转入宿主E.coliBL21(DE3),构建共表达重组菌。

5.如权利要求3所述的应用,其特征在于,所述催化剂按如下方法制备:将含草铵膦脱氢酶基因和醇脱氢酶突变体基因的共表达重组菌接种至含50μg/ml氨苄霉素抗性的LB液体培养基,37 ℃,200rpm下培养12h,再以体积浓度2%接种量接种至新鲜的含有50μg/mL氨苄霉素抗性的LB液体培养基中,于37 ℃,180rpm下培养至菌体OD600达0.6‑0.8,加入终浓度为12μg/mL的IPTG,28 ℃下诱导培养12h后,4 ℃、8000rpm离心10min,弃去上清液,收集沉淀,用pH 7.5、20mM磷酸钠缓冲液洗涤两次,获得湿菌体。