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专利号: 2023109776500
申请人: 湖南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种棘胸蛙环境DNA PCR检测方法,其特征在于,包括以下步骤:S01,获取棘胸蛙的环境DNA样本;

S02,以环境DNA样本为模板,进行PCR扩增;

S03,分析有无目标DNA片段,判断是否存在棘胸蛙;

S02中,进行PCR扩增的引物序列SEQ ID NO:1‑2为:SEQ ID NO:1 F: CTTTGGAGACCGCTGTAAAAGA;

SEQ ID NO:2 R: TGAAAGTCTACTTCCAAAAGTGCAA。

2.根据权利要求1所述的棘胸蛙环境DNA PCR检测方法,其特征在于,S03中,所述目标DNA片段为棘胸蛙的特异性DNA片段。

3.根据权利要求1或2所述的棘胸蛙环境DNA PCR检测方法,其特征在于,S01中,所述棘胸蛙的环境DNA样本为棘胸蛙栖息地的土壤或水。

4.根据权利要求1或2所述的棘胸蛙环境DNA PCR检测方法,其特征在于,还包括对所述棘胸蛙的环境DNA样本的冷冻保存和扩增前的解冻步骤。

5.根据权利要求1或2所述的棘胸蛙环境DNA PCR检测方法,其特征在于,还包括对所述棘胸蛙的环境DNA样本进行富集的步骤。

6.根据权利要求1或2所述的棘胸蛙环境DNA PCR检测方法,其特征在于,所述PCR扩增的反应体系为20 μL,其中10.0μL 2 x Rapid Tag Master Mix,7.0 μL H2O,1.0 μL引物F,

1.0 μL引物R,模板DNA 1.0 μL。

7.根据权利要求1或2所述的棘胸蛙环境DNA PCR检测方法,其特征在于,所述PCR扩增的反应条件为:94 ℃预变性10 min;94 ℃变性30 s,58 ℃退火30 s,72 ℃延伸60 s,共35个循环;最后72 ℃延伸10min,4℃保存。

8.根据权利要求1或2所述的棘胸蛙环境DNA PCR检测方法,其特征在于,用1.0%琼脂糖凝胶电泳PCR产物,电泳结果在凝胶成像系统中拍照、保存。