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专利号: 2023108319175
申请人: 江苏科技大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-03-02
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.蚕丝蛋白源免疫肽的制备方法,其特征在于,所述方法采用NaOH‑尿素溶液溶解蚕丝纤维得到丝素蛋白,然后用超声波粉碎‑碱性蛋白酶联合处理得到酶解产物,酶解产物依次经Sephadex‑G100、Sephadex‑G15分离得到分子量小于1000Da的有效组分,有效组分经HPLC纯化得到分子量为401.09 ‑ 556.17Da的短肽化合物,即为蚕丝蛋白源免疫肽,经陶瓷膜过滤得到免疫肽浓缩液;

所述免疫肽为单链多肽,其氨基酸序列为SEQ ID NO:1。

2.根据权利要求1所述的蚕丝蛋白源免疫肽的制备方法,其特征在于,所述方法具体步骤包括:S1、制备丝素蛋白

将蚕丝纤维溶于NaOH‑尿素溶液中,搅拌至完全溶解,得到丝素蛋白溶液,离心收集沉淀、透析、冷冻干燥;

S2、超声粉碎

将S1获得的产物采用超声波破碎仪进行粉碎处理,条件为超声功率550‑560 W、料液比

10.5%‑11.5%、温度37‑38℃、时间93‑95 min;

S3、碱性蛋白酶酶解

将S2粉碎后的产物采用碱性蛋白酶酶解,酶解条件为加酶量5800U/g,温度56℃,pH8.0;

S4、分离纯化

将S3酶解后产物依次采用葡聚糖凝胶层析柱Sephadex G‑100、Sephadex G‑15进行分离,以提高小鼠脾淋巴细胞增殖率为评价指标筛选收集活性最佳组分,再以HPLC纯化,获得分子量在401.09 ‑ 556.17Da的蚕丝蛋白免疫肽产物;

S5、免疫肽活性富集

将S4获得的免疫肽产物通过陶瓷膜过滤,工作压力0.15‑0.25 Mpa,工作时间1.5‑2.5 h,得到蚕丝蛋白免疫肽浓缩液,其免疫活性是浓缩前的8‑9倍;

S6、免疫肽干燥

将S5获得的浓缩液经‑80°C冷冻干燥,得到蚕丝蛋白源免疫肽干粉。

3.根据权利要求2所述的蚕丝蛋白源免疫肽的制备方法,其特征在于,S1中蚕丝纤维与NaOH‑尿素溶液的质量体积比为g:L=19:1‑ 22:1。

4.根据权利要求2所述的蚕丝蛋白源免疫肽的制备方法,其特征在于,S1中NaOH‑尿素溶液的NaOH浓度为1.2‑1.5 mol/L、尿素浓度为8‑10 mol/L。

5.根据权利要求2所述的蚕丝蛋白源免疫肽的制备方法,其特征在于,采用高效液相色谱‑质谱联用技术,分析蚕丝蛋白免疫肽的分子量和结构。