1.一种基于免标记SERS金属纳米探针的黄曲霉毒素亚型分析方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将Au‑AgJanusNPs和AumushroomNPs分别与黄曲霉毒素的适配体AFB1‑Apt和AFB2‑Apt孵育过夜,固液分离取固相,并将固相分散在溶剂中,得到Au‑AgJanusNPs/AFB1‑Apt溶液和Au‑mushroomNPs/AFB2‑Apt溶液;
(2)将Fe3O4@AuNPs等分成两份,其中一份与AFM1的适配体AFM1‑Apt以及AFB1适配体互补链AFB1‑Apt‑C混合孵育过夜,另一份与AFM1适配体互补链AFM1‑Apt‑C以及AFB2适配体互补链AFB2‑Apt‑C混合孵育过夜,将两份反应液固液分离取固相,并将固相分散在溶剂中得到混合溶液;
(3)将步骤(1)中Au‑AgJanusNPs/AFB1‑Apt溶液和Au‑mushroom NPs/AFB2‑Apt溶液和步骤(2)所得混合溶液孵育后最终得到用于黄曲霉毒素亚型分析的组装体,将其与待检测溶液在缓冲溶液中混合反应,反应后磁性分离取固相,并检测固相的SERS信号强度或T2值强度,实现黄曲霉毒素的定性和定量分析。
2.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素亚型分析方法,其特征在于,步骤(1)中所述Au‑AgJanusNPs的制备方法如下:将AuNPs溶液与MBIA在50‑70℃下混合孵育,并加入对苯二酚和银盐溶液,静置反应2‑
6h后,获得Au‑AgJanusNPs。
3.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素亚型分析方法,其特征在于,步骤(1)中所述Au‑mushroomNPs的制备方法如下:将AuNPs溶液与DPI在50‑70℃下混合孵育,并加入NaOH、DHN和HAuCl4溶液,静置反应12h以上,获得Au‑mushroomNPs。
4.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素亚型分析方法,其特征在于,步骤(2)中所述Fe3O4@AuNPs的制备方法如下:S1,将铁盐和柠檬酸三钠溶解于乙二醇中,再加入醋酸钠,搅拌均匀后置于反应釜中加热反应,得到Fe3O4NPs;
S2,将S1中所得到的Fe3O4NPs与PEI溶液混合并超声处理,加入Au种子溶液超声后,将其添加到含PVP和盐酸羟胺的水溶液中,并加入HAuCl4溶液超声得到Fe3O4@AuNPs。
5.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素亚型分析方法,其特征在于,所述定量检测黄曲霉毒素三种亚型为AFB1、AFB2和AFM1。
6.根据权利要求5所述的黄曲霉毒素亚型分析方法,其特征在于,AFB1的检测浓度范围为0.01ng/mL‑10.00ng/mL,AFB2的检测浓度范围为0.10pg/mL‑5.00ng/mL,AFM1的检测浓度范围为0.10pg/mL‑0.50ng/mL。
7.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素亚型分析方法,其特征在于,步骤(1)中所述黄曲霉毒素的适配体AFB1‑Apt的序列为‑SH‑(CH2)6‑GTTGGGCAC GTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACA;AFB2‑Apt序列为‑SH‑(CH2)6‑AGCAGCACAGAGGTCAGATGCTGACAC CCTGGACCTTGGGATTCCGGAAGTTTTCCGGTACCTATGCGTGCT ACCGTGAA。
8.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素亚型分析方法,其特征在于,步骤(2)中AFM1的适配体AFM1‑Apt的序列为‑SH‑(CH2)6‑ACTGCTAGAGATTTT CCACAT,AFB1适配体互补链AFB1‑Apt‑C的序列为‑SH‑(CH2)6‑GAGAGA CAACACGTGCCCAAC;所述AFM1适配体互补链AFM1‑Apt‑C的序列为‑SH‑(CH2)6‑ATGTGGAAAATCTCTAGCAGT,AFB2适配体互补链AFB2‑Apt‑C的序列为‑SH‑(CH2)6‑GCATCTGACCTCTGTGCTGCT。
9.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素亚型分析方法,其特征在于,步骤(3)中定量分析的标准曲线的制备方法如下:将组装体与不同浓度的黄曲霉毒素亚型溶液混合,反应后固液分离取固相,检测固相‑1
的SERS信号强度或T2值强度,以黄曲霉毒素浓度的对数值为横坐标,分别以1278cm 和‑1
1000cm 处的SERS信号强度以及T2值强度为纵坐标,得到所述的标准曲线。
+
10.根据权利要求9所述的黄曲霉毒素亚型分析方法,其特征在于,使用785nmAr 离子激光源检测SERS信号强度。