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专利号: 2023104779201
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.利用柑橘RUB2调控柑橘泛素化途径改良柑橘黄龙病抗性的方法,其特征在于,利用柑橘RUB2调控柑橘泛素化途径,影响植物防御相关基因的表达,从而增强柑橘对黄龙病的抗性;所述柑橘RUB2的核苷酸序列如SEQ ID No.1;

具体方法,包括以下步骤:

步骤1:获得柑橘RUB2编码序列;

步骤2:用组成型启动子35S或CaMV 35S调控步骤1获得的柑橘RUB2编码序列,构建超量表达载体;

步骤3:将步骤2得到的植物表达载体整合到柑橘基因组中;

步骤4:将通过步骤3获得的柑橘进行的培养,并获得转基因植株和转基因毛状根;

步骤5:将通过步骤4获得的转基因植株和转基因毛状根进行的检测筛选出超量表达柑橘RUB2的植株和毛状根;

步骤6:将通过步骤5获得的转基因植株和转基因毛状根进行柑橘黄龙病抗性评价,获得调控柑橘RUB2增强柑橘黄龙病抗性的转基因植株和转基因毛状根;

步骤7:将通过步骤5获得的转基因植株检测相关防御基因表达量、激素和活性氧含量,明确柑橘RUB2调控柑橘防御反应的机理。

2.根据权利要求1所述的利用柑橘RUB2调控柑橘泛素化途径改良柑橘黄龙病抗性的方法,其特征在于,调控柑橘RUB2基因表达改良柑橘黄龙病抗性的方式为上调柑橘RUB2表达。

3.根据权利要求1所述的利用柑橘RUB2调控柑橘泛素化途径改良柑橘黄龙病抗性的方法,其特征在于,用于上调柑橘RUB2表达的植物表达载体中含有强启动子控制柑橘RUB2基因表达的阅读盒,将含有强启动子调控的柑橘RUB2阅读盒的T‑DNA导入柑橘中,实现上调柑橘RUB2,并获得抗性显著提高的转基因植株。

4.根据权利要求1所述的利用柑橘RUB2调控柑橘泛素化途径改良柑橘黄龙病抗性的方法,其特征在于,步骤1中的柑橘RUB2编码序列包括以晚锦橙cDNA为模板克隆得到的柑橘RUB2编码序列,克隆柑橘RUB2基因片段所采用的引物为CsRUB2‑f和CsRUB2‑r;CsRUB2‑f的核苷酸序列如SEQ ID No.2,CsRUB2‑r的核苷酸序列如SEQ ID No.3。

5.根据权利要求1所述的利用柑橘RUB2调控柑橘泛素化途径改良柑橘黄龙病抗性的方法,其特征在于,步骤2中将构建超量表达载体的方法包括根癌农杆菌介导法和发根农杆菌介导法。

6.根据权利要求1所述的利用柑橘RUB2调控柑橘泛素化途径改良柑橘黄龙病抗性的方法,其特征在于,步骤4中的转基因植株筛选方法包括抗性筛选、GUS组织化学染色和PCR验证。

7.根据权利要求1所述的利用柑橘RUB2调控柑橘泛素化途径改良柑橘黄龙病抗性的方法,其特征在于,步骤5中筛选柑橘RUB2的超量植株和毛状根的方法为定量PCR法;步骤7中检测转基因植株相关防御基因表达量方法为定量PCR法。

8.根据权利要求1所述的利用柑橘RUB2调控柑橘泛素化途径改良柑橘黄龙病抗性的方法,其特征在于,步骤6中黄龙病抗性评价方法为嫁接传毒方法,利用定量PCR检测植株和毛状根中病原菌的含量,并进行长期的症状观察。