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专利号: 2020115871091
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.柑橘黄龙病病原菌培养方法,其特征在于,包括:(1)柑橘黄龙病毒源准备;(2)毒源材料表面消毒处理;(3)试管砧木准备和嫁接接种;(4)增殖培养;所述增殖培养包括以下步骤:配制MS液体培养基,向培养基中添加多菌灵,分装到带滤纸桥的试管中,灭菌;随后采用试管嫁接法接种黄龙病病原菌,切取经消毒处理的毒源材料的腋芽,嫁接于柑橘试管砧木上;然后将嫁接苗放入滤纸桥中;再于24‑28℃暗室培养14~21d,待试管嫁接带菌芽的萌芽长至0.5‑1.0cm时,转入12‑16h的光周期下培养;其中所述柑橘黄龙病毒源准备包括以下步骤:从田间感染黄龙病植株上采枝条,选择有部分叶片显症、表面无病虫害损伤的枝条,枝条上保留2‑3片叶,以黄龙病菌检测为阳性的枝条直接用作病原菌CLas试管接种的毒源;或事先准备好1年生左右的温网室中保存的柑橘实生苗,从田间感黄龙病柑橘植株上取枝条,取双芽枝段嫁接在实生苗上,继续保存在温室中按照常规的柑橘育苗方法进行管理;在嫁接接种黄龙病病原菌后3个月左右,对传毒的柑橘实生苗进行黄龙病病原菌CLas检测,以检测为阳性的植株枝条作为试管苗接种毒源;

所述毒源材料表面消毒处理包括以下步骤:从感黄龙病柑橘植株上取枝条,减去叶片和刺,用棉花蘸洗涤剂原液仔细擦拭枝条,自来水冲洗干净;在超净工作台上用无菌水漂洗,酒精溶液浸泡,随后用无菌水漂洗;然后用HgCl2溶液浸泡;再用无菌水冲洗后备用。

2.根据权利要求1所述的培养方法,其特征在于,所述多菌灵的用量为使其终浓度为

0.15%‑0.3wt%。

3.根据权利要求1或2所述的培养方法,其特征在于,所述酒精溶液的浓度为75%,以体积百分比计,酒精溶液的浸泡时间为60s。

4.根据权利要求1或2所述的培养方法,其特征在于,所述HgCl2溶液的浓度为0.1wt%,HgCl2溶液的浸泡时间为8‑10min。

5.根据权利要求1或2所述的培养方法,其特征在于,所述试管砧木准备包括以下步骤:

取出柑桔种子,清水洗净,消毒后,无菌水冲洗;随后剥去外种皮,接种在已消毒的MS固体培养基中;然后在26‑28℃黑暗条件下培养2~3周,获得试管砧木。

6.根据权利要求5所述的培养方法,其特征在于,所述柑桔种子的消毒包括以下步骤:

用酒精表面消毒后,再用0.1wt%的升汞或4wt%二氯异氰尿酸钠消毒10分钟。