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专利号: 2023102540709
申请人: 青岛大学附属医院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-11-27
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种软骨修复用明胶聚己内酯蛋白肽复合气凝胶的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

S1将明胶、聚己内酯加入到200‑300mL六氟异丙醇中,在30‑50℃下以600‑800rpm搅拌速度搅拌20‑30min,加入10‑20mL 0‑5℃ 0.1‑0.5wt%的乙酸水溶液,在30‑50℃下以600‑

800rpm搅拌速度继续搅拌20‑24h,然后在固定电压10‑30KV,流速为1‑2mL/h条件下制备明胶、聚己内酯静电纺丝膜,纺丝膜的厚度为20nm‑10μm,将静电纺丝膜在‑25 ‑20℃下冷冻干~燥8‑10h后经紫外线照射20‑30min后备用;

S2将牛骨粉与水混合后在95‑100℃下提取8‑10h,提取2‑3次,合并提取液过滤得到滤液,再将滤液于55‑60℃下旋蒸至提取液体积的20‑30%得到浓缩液,然后添加胰蛋白酶,在

35‑38℃下酶解3‑4h,然后将酶解液放入高压灭菌锅中,98‑100℃灭酶10‑15min,待其冷却后于6500‑8000rpm下离心10‑12min取上清液,将上清液过滤,将所得滤液超滤处理后经紫外线照射20‑30min得到牛骨胶原蛋白肽溶液备用;

S3将步骤S1得到的静电纺丝膜在高通量组织研磨仪中制备成1μm~1mm短纤维后加入到80‑90wt%叔丁醇水溶液中得到短纤维叔丁醇溶液,然后将短纤维叔丁醇溶液与牛骨胶原蛋白肽溶液混合均匀后,在﹣50﹣40℃下冷冻干燥20‑24h得到软骨修复用明胶聚己内酯蛋~白肽复合气凝胶;

所述聚己内酯为改性聚己内酯,其制备方法如下:

1)将壳聚糖加入到10‑20wt%乙酸水溶液中,加入乙酸酐,加热至80‑120℃,反应4‑6h,冷却至室温,加入0‑5℃水,搅拌5‑10min后用氯仿萃取2‑3次,合并有机相,有机相用无水硫酸钠干燥10‑12h,过滤,收集滤液,将滤液减压蒸除溶剂后得到的剩余物在60‑80℃干燥6‑

8h得到酰化壳聚糖;

2)在氮气气氛下,将步骤1)得到的酰化壳聚糖、苄胺、四氢呋喃混合,在50‑70℃反应3‑

5h,冷却至室温,减压浓缩至原体积的20‑30%后,用氯仿萃取2‑3次,合并有机层,并用无水硫酸钠干燥10‑12h,过滤,收集滤液后减压蒸除溶剂,将剩余物经柱层析纯化,流动相为体积比为2‑3:1的乙酸乙酯与正己烷的混合液,将洗脱液减压蒸除溶剂后得到的剩余物在60‑

80℃干燥4‑6h得到乙酰壳聚糖衍生物;

3)在氮气气氛下,将步骤2)得到的乙酰壳聚糖衍生物、四氢呋喃、三乙胺混合后,在0‑5℃下以1‑2滴/秒的速度滴加甲基丙烯酰氯,滴加完成后,在0‑5℃下继续反应4‑6h,反应完成后减压浓缩至原体积的20‑30%后,将剩余液体用氯仿萃取2‑3次,合并有机层,并用无水硫酸钠干燥10‑12h,过滤,收集滤液后减压蒸除溶剂,将剩余物经柱层析纯化,流动相为体积比为2‑3:1的乙酸乙酯与正己烷的混合液,将洗脱液减压蒸除溶剂后得到的固体在60‑80℃干燥4‑6h得到酯化壳聚糖衍生物;

4)在氩气气氛下,将步骤3)得到的酯化壳聚糖衍生物加入到N,N‑二甲基甲酰胺中于室温下搅拌10‑20min,加入四甲基二丙烯三胺、α‑溴异丁酰溴,在室温下继续搅拌10‑20min,加入氯化亚铜混合均匀后加热至80‑120℃,反应18‑20h,反应完成后向反应液中加入0‑5℃的无水甲醇,搅拌5‑10min,有沉淀产生,过滤,收集沉淀,将沉淀用四氢呋喃溶解后通过中性Al2O3柱,收集滤液,滤液减压蒸除溶剂后得到的剩余物在60‑80℃干燥4‑6h得到壳聚糖基偶合物;

5)将ε‑己内酯、壳聚糖基偶合物、乳糖酶、分子筛混合后在40‑60℃搅拌20‑30min后加入二氯甲烷,在40‑60℃继续搅拌1‑2h后,冷却至室温,过滤,收集滤液,将滤液减压蒸除溶剂后加入到0‑5℃的无水甲醇中,在6000‑8000rpm转速下离心1‑2h,过滤,收集沉淀物,沉淀物用丙酮抽提20‑24h后在30‑50℃下干燥40‑48h得到改性聚己内酯。

2.如权利要求1所述的软骨修复用明胶聚己内酯蛋白肽复合气凝胶的制备方法,其特征在于:所述步骤S1中明胶、聚己内酯、六氟异丙醇、乙酸水溶液的质量比为5‑10:2‑5:15‑

25:3‑10。

3.如权利要求1所述的软骨修复用明胶聚己内酯蛋白肽复合气凝胶的制备方法,其特征在于:所述步骤S2中牛骨粉与水的质量比为1:10‑15。

4.如权利要求1所述的软骨修复用明胶聚己内酯蛋白肽复合气凝胶的制备方法,其特征在于:所述步骤S2中胰蛋白酶的加入量为浓缩液质量的0.1‑0.5wt%。

5.如权利要求1所述的软骨修复用明胶聚己内酯蛋白肽复合气凝胶的制备方法,其特征在于:所述步骤1)中壳聚糖、乙酸水溶液、乙酸酐的用量比为2‑5g:50‑100mL:20‑30mL。

6.如权利要求1所述的软骨修复用明胶聚己内酯蛋白肽复合气凝胶的制备方法,其特征在于:所述步骤2)中酰化壳聚糖、苄胺、四氢呋喃的用量比为1‑3g:3‑5g:30‑50mL。