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专利号: 2023102021266
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-08-25
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种高催化活力和立体选择性的腈水解酶突变体,其特征在于,所述腈水解酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列突变为下列之一:(1)第135位苯丙氨酸突变为亮氨酸,且第199位精氨酸突变为色氨酸;(2)第135位苯丙氨酸突变为亮氨酸,第199位精氨酸突变为色氨酸,且第59位苏氨酸突变为天冬氨酸。

2.一种权利要求1所述腈水解酶突变体的编码基因。

3.一种含权利要求2所述编码基因的重组基因工程菌。

4.一种权利要求1所述腈水解酶突变体在催化外消旋3‑氰基己腈制备(R)‑3‑氰基己酸中的应用。

5.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述应用的方法为:以含有腈水解酶突变体编码基因的工程菌经发酵培养、离心获得的湿菌体为催化剂,以外消旋3‑氰基己腈为底物,以pH为5 10的缓冲液为反应介质构成反应体系,在20 55 ℃、200 400 rpm条件下水浴反应~ ~ ~结束后,将反应液分离纯化,获得(R)‑3‑氰基己酸。

6.如权利要求5所述的应用,其特征在于,所述反应体系中底物浓度为100 200 g/L,催~化剂的用量以湿菌体重量计为5 20 g/L。

~

7.如权利要求5所述的应用,其特征在于,所述湿菌体按如下方法制备:将含有腈水解酶突变体编码基因的工程菌接种至含50 μg/mL卡那霉素的LB培养基中,在37 ℃培养12 h,获得种子液;再将种子液以体积浓度2%接种量接种至新鲜的含有终浓度

50 μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,37 ℃培养至菌体浓度OD600达到0.5~0.7,再向培养液中加入终浓度为0.1 mM异丙基‑β‑D‑硫代吡喃半乳糖苷,28 ℃诱导培养12 h,4 ℃、

12000 rpm条件下离心10 min,收集湿菌体。