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专利号: 2023101398496
申请人: 中国石油大学(华东)
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-29
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种低免疫原性、降血压、抗氧化的深海鳕鱼皮小分子胶原蛋白肽的制备方法,包括以下步骤:(1)鱼皮预处理:将深海鳕鱼鱼皮用钢丝刷洗净背部的鱼肉组织,在软化水中浸泡3小时,反复多次高压冲洗后沥水,剪碎,加入氢氧化钠溶液处理12~24h,去除鱼皮中的脂肪和杂蛋白,用软化水将鱼皮洗至中性;

(2)端肽去除:将步骤(1)获得的鱼皮按照料液比1:15~1:20加入到乙酸溶液中,加入胃蛋白酶,磁力搅拌处理12~72h,采用100kDa透析袋透析,保留截留组分;

(3)复合酶解‑超滤耦合工艺获得胶原蛋白肽:将步骤(2)获得的截留组分调整pH值为

7.0,加入鱼皮质量1%~3%的复合蛋白酶,于40~60℃酶解2~24h,得到胶原蛋白肽粗提液,在95~100℃保温10~20min灭酶,并通过截留分子量为1kDa的超滤膜,保留滤过组分;

(4)生物活性小分子胶原蛋白肽的纯化:使用葡聚糖凝胶Sephedax G‑25分子筛层析对步骤(3)获得的滤过组分进行分离纯化,收集合并各个峰组分,使用反相色谱C18柱对活性最高的组分进一步精制纯化,最终得到具有ACE抑制活性和抗氧化活性的高纯度胶原蛋白肽,冷冻干燥;

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(5)细菌和内毒素去除:对步骤(4)中得到的高纯度胶原蛋白肽进行 Co辐照处理,灭活内毒素,灭菌、包装,得的所述低免疫原性、降血压、抗氧化的深海鳕鱼皮小分子胶原蛋白肽;

其中,步骤(1)中的氢氧化钠溶液浓度为0.01~0.02M,鱼皮与氢氧化钠溶液料液比为

1:10~1:20;

步骤(2)中的乙酸溶液使用0.5M浓度,料液比1:15~1:20,胃蛋白酶浓度使用60~

100IU/mL;

步骤(3)中的复合蛋白酶使用中性蛋白酶和菠萝蛋白酶,两者质量比为1:2~1:4,酶解温度为40~60℃,酶解时间2~24h;

步骤(4)中Sephedax G‑25分子筛层析使用超纯水作为流动相,线性流速0.8ml/min,

220nm波长处检测,反相色谱使用XTerra Prep MS C18制备柱,流动相A液为含0.1%TFA的

5%乙腈水溶液,B液为含0.1%TFA的90%乙腈水溶液,0‑5min使用100%的A液平衡柱子,5‑

20min,线性上升到100%B液洗脱,220nm波长处检测洗脱峰。

2.根据权利要求1所述的制备方法得到的胶原蛋白肽在制备降血压和抗氧化药物中的应用。