1.一种7‑DHC出胞分泌合成的酿酒酵母基因工程菌,由如下方法构建获得:将底盘菌酿酒酵母基因组强化表达截短3‑羟基‑3甲基戊二酰辅酶A还原酶tHMG1、角鲨烯环氧酶ERG1、NADH激酶POS5、羊毛甾醇去甲基化酶ERG11、角鲨烯合酶ERG9、异戊烯基焦磷酸异构酶IDI1、磷酸戊酸激酶ERG8、甲羟戊酸激酶ERG12、法尼基焦磷酸合酶ERG20、二磷酸甲羟戊酸脱羧酶ERG19,并异源表达Gallus Gallus来源的24‑甾醇还原酶DHCR24,敲除麦角固醇合成所需的C‑22甾醇去饱和酶ERG5、半乳糖/乳糖代谢调节蛋白GAL80以及在GAL4系统中充当抑制因子+的半胱氨酸蛋白酶GAL6和MIG1,敲除NADP特异性谷氨酸脱氢酶GDH1,敲除二酰基甘油焦磷酸磷酸酶DPP1,敲除能将醇类脱氢的酶ADH3,并异源表达甾醇转运蛋白ST1和PR‑1,获得所述7‑DHC出胞分泌合成的酿酒酵母基因工程菌。
2.如权利要求1所述的酿酒酵母基因工程菌,其特征在于所述底盘菌为酿酒酵母CEN.PK2‑1C。
3.如权利要求1所述的酿酒酵母基因工程菌,其特征在于:通过PGAP启动子强化表达tHMG1,通过PGAL2启动子强化表达ERG1,通过PGAL1启动子强化表达ERG11,通过PGAL1启动子强化表达POS5,通过PGAL1,10双向启动子强化表达ERG8和ERG12,通过PGAL1,10双向启动子强化表达ERG20和ERG9,通过PGAL1,10双向启动子强化表达IDI1和ERG19,通过PGAP启动子异源表达DHCR24,通过PGAL1启动子异源表达ST1和PR‑1。
4.构建权利要求1所述酿酒酵母基因工程菌的方法,其特征在于所述方法包括如下步骤:
(1)敲除麦角固醇合成所需的C‑22甾醇去饱和酶ERG5,并将PGAP‑DHCR24‑TCYC1片段整合到酿酒酵母CEN.PK2‑1C基因组上的ERG5酶位点,构建得到的酿酒酵母命名为sc1菌株;
(2)将PGAL2‑ERG1‑TCYC1片段整合至sc1菌株基因组上,整合至GAL6位点,构建得到酿酒酵母命名为sc2菌株;
(3)将PGAL1‑tHMG‑TCYC1片段整合至sc2菌株基因组上Ty1两端的δ序列中,构建得到酿酒酵母菌株命名为sc3菌株;
(4)将TTEF‑TADH1‑ERG8‑PGAL10‑PGAL1‑ERG12‑TCYC1片段整合至sc3菌株基因组上的GAL80酶位点,构建得到酿酒酵母菌株命名为sc4菌株;
(5)将TTEF‑PGAL1‑POS5‑TCYC1片段整合至sc4菌株基因组上的MIG1位点,构建得到酿酒酵母菌株命名为sc5菌株;
(6)将TTEF‑TADH1‑ERG9‑PGAL10‑PGAL1‑ERG20‑TCYC1片段整合至sc5菌株基因组上的DPP1位点,构建得到酿酒酵母菌株命名为sc6菌株;
(7)将TTEF‑PGAL1‑ERG11‑TCYC1片段整合至sc6菌株基因组上的GDH1位点,构建得到酿酒酵母菌株命名为sc7菌株;
(8)将TTEF‑TADH1‑IDI1‑PGAL10‑PGAL1‑ERG19‑TCYC1片段整合至sc7菌株基因组上的ADH3位点,构建得到酿酒酵母菌株命名为sc8菌株;
(9)将PGAL1‑DHCR24‑TCYC1片段整合至sc8菌株基因组上的Ty3位点,构建得到酿酒酵母菌株命名为sc9菌株;
(10)将H1‑PGAL1‑ST1‑PGAL1‑PR1‑H2导入sc9菌株基因组,构建得到酿酒酵母菌株命名为sc13菌株,即所述7‑DHC出胞分泌合成的酿酒酵母基因工程菌。
5.权利要求1所述酿酒酵母基因工程菌在微生物发酵制备7‑DHC中的应用。
6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述应用为:将所述酿酒酵母基因工程菌接种至发酵培养基,并添加初始培养基5~10%体积的正十二烷作为萃取剂,于28~32℃下进行发酵培养48~96h,发酵液经分离纯化获得所述7‑DHC。