利索能及
我要发布
收藏
专利号: 202310018706X
申请人: 南京森林警察学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种马来穿山甲STR分子标记引物在马来穿山甲个体识别上的应用,其特征在于,具体包括如下内容:S1:马来穿山甲STR分子标记分型图谱的获得:剪取待检测马来穿山甲的肌肉组织或鳞甲组织,按磁珠法提取待检测马来穿山甲的样本DNA;随后以其为模板DNA,进行荧光STR‑PCR复合扩增,分别扩增16个STR分子标记;得到的荧光STR‑PCR复合扩增产物通过毛细管电泳偶联荧光检测技术进行检测,电泳、荧光检测结果用GeneMapper软件进行分析,获得样本STR分子标记的分型图谱,所述马来穿山甲STR分子标记引物核苷酸序列如表6所示:表6扩增马来穿山甲STR分子标记所用引物序列

S2:不同马来穿山甲样本同一性认定的统计学计算:当两份样本在所检测的16个基因座的STR分型,有1个以上位点不一致时,即排除两份样本来自同一个体;当两份样本在所检测的16个基因座的STR分型完全一致时,需计算其个体识别的证据强度,即似然率;

S3:同一性的认定:

(1)当两份样本在所检测的16个基因座的STR分型完全一致,且似然率大于或等于1×

4 12

10时,不排除两份样本的同一性;当似然率大于或等于1×10 时,强有力支持两份样本的同一性,可认定两份样本的同一性,即两份样本属于同一马来穿山甲个体;似然率越大对同一性的支持强度越大;

(2)当两份样本在所检测的16个基因座的STR分型,有1个以上位点不一致时,可排除两份样本的同一性,即两份样本属于不同的马来穿山甲个体;

马来穿山甲样本的似然率计算过程如下:

(1)分别对所有马来穿山甲个体样本的16个基因座进行STR复合扩增,扩增产物通过毛细管电泳检测获得STR分型图谱,统计所检测的每个基因座的每种等位基因分型的数量,进而计算每种等位基因分型在该基因座所有分型中的占比,即为该等位基因分型的等位基因频率,16个STR位点等位基因频率分布如表4所示:表4马来穿山甲16个STR分子标记等位基因频率分布表(2)某个STR基因座的表型频率的计算方法为:设:某马来穿山甲样本的某个STR基因座的等位基因1的频率为p,等位基因2的频率为q;

(a)若通过STR复合扩增、毛细管电泳检测所得数据显示该样本在该基因座为纯合子,2

即一对等位基因具有相同的分型,表型频率计算公式为:表型频率=p;

(b)若通过STR复合扩增、毛细管电泳检测所得数据显示该样本在该基因座为杂合子,即一对等位基因具有不同的分型,表型频率计算公式为:表型频率=2pq;

(c)由于STR为共显性遗传标记,因此等位基因的表型频率和基因型频率一致;

(3)所述个体识别的证据强度,即似然率的计算公式为:LR=1/P(X)

其中P(X)代表表型组合X的组合概率;

P(X)=P1×P2×P3×…×Pi

Pi为第i个基因座的表型频率,其是根据表4中的等位基因频率进行确定。