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专利号: 2023100029418
申请人: 临沂大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一组利用小卫星DNA标记Trip‑yark01对叶尔羌高原鳅基因型进行检测的引物,其特征在于,其中所述的引物为序列:

正链5’ ‑ atcagccttaactttggtcccgt ‑3’,

负链5’‑ atccgcatgcctttggacaggt ‑3’,使用该标记时的退火温度为55℃。

2.利用小卫星DNA标记Trip‑yark01对叶尔羌高原鳅基因型进行检测的方法,其特征在于,首先提取叶尔羌高原鳅肌肉中的基因组DNA并稀释备用;再利用叶尔羌高原鳅DNA序列中含有的微卫星核心序列,使用特异性引物对叶尔羌高原鳅不同个体的基因组DNA进行PCR扩增,对PCR产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,从而确定叶尔羌高原鳅不同个体在Trip‑yark01核心序列区的基因型,其中所述的叶尔羌高原鳅小卫星DNA标记Trip‑yark01即特异性引物为:正链5’ ‑ atcagccttaactttggtcccgt ‑3’,

负链5’‑ atccgcatgcctttggacaggt ‑3’,使用该标记时的退火温度为55℃。

3.如权利要求2所述的利用小卫星DNA标记Trip‑yark01对叶尔羌高原鳅基因型进行检测的方法,其特征在于,对不同叶尔羌高原鳅个体的基因组DNA进行的PCR扩增,其加样参数为:每个PCR反应总体积为25μl,包括100ng叶尔羌高原鳅基因组DNA;10×PCR Buffer,2.5μ

2+

l;Mg  1.5 mmol/L;Taq酶1u;dNTP 0.1mmol/L;权利要求1中的特异性引物各10 pmol;最后加ddH2O至25μl;设置PCR仪的程序参数为:94℃变性2min;94℃ 45sec,55℃ 1min,72℃ 

40sec,该反应进行35个循环;72℃延伸5 min,4℃保存。

4.如权利要求2所述的利用小卫星DNA标记Trip‑yark01对叶尔羌高原鳅基因型进行检测的方法,其特征在于,对PCR产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测的步骤:将PCR产物在

8%的变性聚丙烯酰胺凝胶中以15W恒功率电泳1.5小时进行分离, 以10%的冰醋酸溶液浸泡30min,然后蒸馏水冲洗5min,再以0.1%的硝酸银溶液浸泡30min,用3%的碳酸钠溶液显色 5min,最后用10%的冰醋酸溶液浸泡5min。

5.权利要求2‑4所述的方法在叶尔羌高原鳅群体间遗传多态性图谱构建上的应用。