1.SerA和/或FliZ编码基因在调控贝莱斯芽孢杆菌杆菌霉素L产量中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,通过敲除或者失活贝莱斯芽孢杆菌中SerA和/或FliZ编码基因提高贝莱斯芽孢杆菌杆菌霉素L产量。
3.一种高产杆菌霉素L的基因工程菌,其特征在于,所述基因工程菌以贝莱斯芽孢杆菌为出发菌株,敲除或者失活菌株基因组中负调控基因SerA和/或FliZ所得。
4.根据权利要求3所述的高产杆菌霉素L的基因工程菌,其特征在于,所述负调控基因SerA,FliZ的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
5.根据权利要求1所述的高产杆菌霉素L的基因工程菌,其特征在于,所述贝莱斯芽孢杆菌优选为贝莱斯芽孢杆菌CPLK1314。
6.一种权利要求1所述高产杆菌霉素L的基因工程菌的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)以SerA,FliZ编码基因为模板设计引物,以贝莱斯芽孢杆菌CPLK1314的基因组DNA作为模板,扩增到部分SerA,FliZ基因片段;
(2)同源重组质粒载体pMUTINSerA的构建:扩增的SerA基因片段经过双酶切,然后连接到经过同样双酶切的质粒载体pMUTINLoc中,构建同源重组整合质粒载体pMUTINSerA;
(3)同源重组质粒载体pUCSCFliZ的构建:扩增的FliZ基因片段经过双酶切,然后连接到经过同样双酶切的质粒载体pUCSCSrf中,构建同源重组整合质粒载体pUCSCFliZ;
(4)SerA基因失活突变菌株ΔSerA的构建:将构建好的重组质粒pMUTINSerA转化至贝莱斯芽孢杆菌CPLK1314得到高产杆菌霉素L的SerA基因失活突变株ΔSerA;
(5)FliZ基因失活突变菌株ΔFliZ的构建:将构建好的重组质粒pUCSCFliZ转化至贝莱斯芽孢杆菌CPLK1314得到高产杆菌霉素L的FliZ基因失活突变株ΔFliZ;
(6)SerA与FliZ双基因失活突变菌株ΔSerA+FliZ的构建:将构建好的重组质粒pMUTINSerA转化至贝莱斯芽孢杆菌CPLK1314突变株ΔFliZ中得到高产杆菌霉素L的SerA与FliZ双基因失活突变菌株ΔSerA+FliZ。
7.根据权利要求6的构建方法,其特征在于,步骤(1)所述的引物为SerA‑F(5′‑TTTAAGCTTCTCAGATAAGATGAGCAATG‑3′)和SerA‑R(5′‑TTTGGATCCTTCCACTTCAAACACGTCAA‑
3′)用于扩增SerA基因片段;FliZ‑F(5’‑TTTGGATCCTCTGCATCTTCTGTCTCCGC‑3’)和FliZ‑R(5’‑TTTAAGCTTCTGATATCGCATAAGCGGG‑3’)用于扩增FliZ基因片段。
8.一种权利要求3所述高产杆菌霉素L的基因工程菌在发酵生产杆菌霉素L中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述发酵为通过基因工程菌进行发酵罐发酵:将菌种活化后制备种子液,按照体积比10‑20%接种量接入新鲜的发酵培养基,开始发酵,发酵过程中控制pH稳定在6.8‑7.2,温度维持在35‑38℃,溶氧在25‑35%之间;发酵周期
40‑50h。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述发酵培养基组成为:蔗糖20g/L,麦芽糖浆40‑50g/L,玉米浆15‑20g/L,尿素0.6‑0.8g/L,K2HPO47g/L,MgSO4·7H2O 0.35g/L,FeSO4·7H2O 10mg/L,(NH4)2SO4 3g/L,MnSO4·H2O 0.05g/L,VB1、VB3、VB5、VB12、VH各1‑
3mg/L,pH 7.0‑7.2。