1.一种高产杆菌霉素L的基因工程菌,其特征在于,所述基因工程菌以解淀粉芽孢杆菌为出发菌株,敲除或者失活菌株基因组中负调控RapF基因所得。
2.根据权利要求1所述的高产杆菌霉素L的基因工程菌,其特征在于,所述负调控RapF基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
3.根据权利要求1所述的高产杆菌霉素L的基因工程菌,其特征在于,所述解淀粉芽孢杆菌优选为解淀粉芽孢杆菌CPLK1314,保藏号CCTCC NO:M2017658。
4.一种权利要求1所述高产杆菌霉素L的基因工程菌的构建方法,其特征在在于,包括如下步骤:
(1)以RapF编码基因为模板设计引物,以解淀粉芽孢杆菌的基因组DNA作为模板,扩增到部分RapF基因片段;
(2)同源重组质粒载体pTCRapF的构建:扩增的RapF基因片段经过EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,然后经过T4DNA连接酶连接到经过同样双酶切的质粒载体pTC中,构建同源重组整合质粒载体pTCRapF;
(3)RapF基因失活突变菌株ΔRapF的构建:将构建好的重组质粒pTCRapF转化至解淀粉芽孢杆菌得到高产杆菌霉素L的基因工程菌RapF基因突变株。
5.根据权利要求4的构建方法,其特征在于,步骤(1)所述的引物为:RapF‑F(5′‑TTTGAATTCGTGACAGGTGTCATATCTTC‑3′)和RapF‑R(5′‑TTT CTCGAG GGTGGCAAAT AAAGAATGAC‑3′)。
6.一种权利要求1所述高产杆菌霉素L的基因工程菌在发酵生产杆菌霉素L的中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述发酵为通过基因工程菌进行发酵罐发酵:将菌种活化后制备种子液,按照体积比15‑20%接种量接入新鲜的发酵培养基,开始发酵,发酵过程中控制pH稳定在7.0左右,温度维持在30℃,溶氧在25‑35%;发酵周期40‑50h。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述发酵培养基组成为:葡萄糖10g/L,麦芽糖浆40‑50g/L,玉米浆15‑20g/L,尿素0.6‑0.8g/L,K2HPO4 7g/L,MgSO4·7H2O 0.35g/L,FeSO4·7H2O 10mg/L,(NH4)2SO4 3g/L,MnSO4·H2O 0.05g/L,VB1、VB3、VB5、VB12、VH各1‑
3mg/L,其余为水,pH 7.0‑7.2。
9.一种权利要求1所述高产杆菌霉素L的基因工程菌在制备防治孢子镰刀菌植物真菌性病害生物试剂中的应用。
10.一种RapF编码基因在调控解淀粉芽孢杆菌杆菌霉素L产量中的应用。