1.产L‑高丝氨酸的重组基因工程菌，由如下方法构建获得：

（1）以菌株E. coli W3110 Trc‑panDTrc‑ppCTrc‑aspCΔpykAΔcycA为底盘菌株，应用CRISPR/Cas9基因编辑技术，回补panD基因原始启动子，得到工程菌HS2；

（2）应用CRISPR/Cas9基因编辑技术，将工程菌HS2的thrA基因解除反馈抑制，得到含有*解除反馈抑制的thrA 基因的工程菌HS3；

（3）将HS3基因组上rhtA基因原始启动子替换成强启动子Trc，得到工程菌HS4；

*

（4）利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将添加上Trc启动子的解除反馈抑制的thrA 基因替换工程菌HS4的fliK基因，得到工程菌HS5；

（5）将菌株HS5基因组上的metL基因原始启动子替换成强启动子Trc，得到工程菌HS6；

（6）利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将添加上Trc启动子的ppC基因替换工程菌HS6的ompT基因，得到工程菌HS7；

（7）将菌株HS7基因组上的pcK基因敲除，得到工程菌HS8；

（8）利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将添加上Trc启动子的rhtA基因替换工程菌HS8的 ylbE基因，得到工程菌HS9；

（9）将菌株HS9基因组上的thrB基因敲除，得到工程菌HS10；

（10）将菌株HS10基因组上的metA基因敲除，得到工程菌HS11；

（11）将菌株HS11基因组上的poxB基因敲除，得到工程菌HS12；

（12）将菌株HS12基因组上的nadK基因原始启动子替换成强启动子Trc，构建得到重组基因工程菌HS13；

*

（13）在质粒pTrc99a上过表达解除反馈抑制的thrA 基因和来源于源谷氨酸棒状杆菌的*天冬氨酸转氨酶基因aspB（cg），构建质粒pTrc99a‑ thrA ‑aspB（cg）并转化到菌株HS13中，得到菌株HS13‑A，即为所述产L‑高丝氨酸的重组基因工程菌；所述panD基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述rhtA基因核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述metL基因核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述ppC基因核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述pcK基因核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，thrB基因核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述metA基因核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，所述poxB基因核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，所述nadK基因核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，所述aspB（cg）基因核苷酸序列如SEQ ID *NO.11所示，所述Trc启动子核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示，所述thrA 基因核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示。

2.构建权利要求1所述基因工程菌的方法，所述方法包括：

（1）以菌株E. coli W3110Trc‑panDTrc‑ppCTrc‑aspCΔpykAΔcycA为底盘菌株，应用CRISPR/Cas9基因编辑技术，回补panD基因原始启动子，得到工程菌HS2；

（2）应用CRISPR/Cas9基因编辑技术，将工程菌HS2的thrA基因解除反馈抑制，得到含有*解除反馈抑制的thrA 基因的工程菌HS3；

（3）将HS3基因组上rhtA基因原始启动子替换成强启动子Trc，得到工程菌HS4；

*

（4）利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将添加上Trc启动子的解除反馈抑制的thrA 基因替换工程菌HS4的fliK基因，得到工程菌HS5；

（5）将菌株HS5基因组上的metL基因原始启动子替换成强启动子Trc，得到工程菌HS6；

（6）利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将添加上Trc启动子的ppC基因替换工程菌HS6的ompT基因，得到工程菌HS7；

（7）将菌株HS7基因组上的pcK基因敲除，得到工程菌HS8；

（8）利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将添加上Trc启动子的rhtA基因替换工程菌HS8的ylbE基因，得到工程菌HS9；

（9）将菌株HS9基因组上的thrB基因敲除，得到工程菌HS10；

（10）将菌株HS10基因组上的metA基因敲除，得到工程菌HS11；

（11）将菌株HS11基因组上的poxB基因敲除，得到工程菌HS12；

（12）将菌株HS12基因组上的nadK基因原始启动子替换成强启动子Trc，构建得到重组基因工程菌HS13；

*

（13）在质粒pTrc99a上过表达解除反馈抑制的thrA 基因和来源于源谷氨酸棒状杆菌的*天冬氨酸转氨酶基因aspB（cg），构建质粒pTrc99a‑ thrA ‑aspB（cg）并转化到菌株HS13中，得到菌株HS13‑A，即为所述产L‑高丝氨酸的重组基因工程菌；所述panD基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述rhtA基因核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述metL基因核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述ppC基因核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述pcK基因核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，thrB基因核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述metA基因核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，所述poxB基因核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，所述nadK基因核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，所述aspB（cg）基因核苷酸序列如SEQ ID *NO.11所示，所述Trc启动子核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示，所述thrA 基因核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示。

3.权利要求1所述基因工程菌在微生物发酵制备L‑高丝氨酸中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述应用为：将所述基因工程菌菌株接种于含有卡那霉素的发酵培养基中，于25～37℃、100～300rpm条件下进行发酵培养至OD600＝0.5~

1.0，添加终浓度为0.2mM的IPTG，继续培养至48h，发酵结束后取发酵液上清分离纯化得到L‑高丝氨酸。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述发酵培养基组成如下：葡萄糖10 30 g/L，~(NH4)2SO4 10~20g/L，酵母提取物 1~5 g/L，KH2PO4 0.5~2.0 g/L，MgSO4 0.5~2.0 g/L，CaCO3 

10 20 g/L， 0.5 2 mL/L微量元素溶液，溶剂为水；微量元素溶液的组分如下：10 g/L ~ ~CaCl2，10 g/L FeSO4·7H2O，1 g/L ZnSO4·7H2O，0.2 g/L CuSO4，0.02 g/L NiCl2·7H2O，溶剂为去离子水。