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专利号: 202211567122X
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种微生物酶解辅助提取枇杷叶总黄酮的方法,其特征在于,所述方法为:(1)垫状青霉(Penicillium pulvillorum)EJ2‑16孢子接种于产酶培养基中,于30℃、200–250r/min振荡培养64–72h,获得的发酵液过滤,收集的滤液为粗酶液;所述垫状青霉EJ2‑16保藏编号:GDMCC No:62907;所述产酶培养基终浓度组成为:玉米粉40–50g/L,蛋白胨5–6g/L,(NH4)2SO4 4–5g/L,KH2PO4 3–5g/L,MgSO4·7H2O 0.5–1.0g/L,CaCl2 0.3–0.5g/L,FeSO4·

7H2O 0.1–0.2g/L,溶剂为自来水,pH 6.0–6.5;(2)将粗酶液与枇杷叶粉混合,于40–45℃条件酶解4–5h,再往酶解体系中加入粗酶液体积2.0–2.5倍的无水乙醇,使体系中乙醇体积分数达到66.7%–71.4%,摇匀后置于水浴温度为70–75℃的超声波清洗机中,100–200W提取

60–90min;超声醇提结束后,趁热抽滤,得总黄酮提取液;粗酶液体积用量以枇杷叶粉质量计为6–10mL/g;(3)总黄酮提取液经减压蒸干,乙醇溶解、离心和真空干燥,得总黄酮提取物。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)所述垫状青霉EJ2‑16在产酶培养前,先经平板培养基培养产生孢子,然后将孢子悬浮于生理盐水中,获得垫状青霉EJ2‑16孢子液,按体积分数5%–6%的量接入产酶培养基进行培养,孢子液按如下方法制备:将垫状青霉EJ2‑16接种于PDA平板培养基,于30℃培养72–80h,获得平板培养物;平板培养物中加入无菌生理盐水,用接种环搅动使孢子悬浮,获得垫状青霉EJ2‑16孢子液。

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)产酶培养基组成为:玉米粉40g/L,蛋白胨6g/L,(NH4)2SO4 4g/L,KH2PO4 5g/L,MgSO4·7H2O 0.5g/L,CaCl2 0.5g/L,FeSO4·

7H2O 0.1g/L,溶剂为自来水,pH 6.0。

4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)所述枇杷叶粉是新鲜枇杷叶,自来水洗净后85℃烘干,粉碎后过40目筛的细粉。

5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中从总黄酮提取液中回收总黄酮的方法为:总黄酮提取液于45℃、–0.1MPa条件下蒸馏至无液体流出,加入体积为原料枇杷叶质量计0.5–1.0mL/g的无水乙醇,充分振荡后于8000r/min离心5–10min,上清液转入到洁净培养皿中,50℃、–0.1MPa真空干燥,得总黄酮提取物。