1.一种多酶级联制备L‑乙烯基甘氨酸的方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)以苏氨酸为原料,添加L‑氨基酸氧化酶和/或D‑氨基酸氧化酶进行生物催化反应得到β‑羟基丁酮酸;所述的L‑氨基酸氧化酶为重组酶CgLAAO,重组酶CgLAAO氨基酸和DNA序列分别为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2;所述的D‑氨基酸氧化酶为重组酶CgDAAO,重组酶CgDAAO的氨基酸和DNA序列分别为SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6;
(2)β‑羟基丁酮酸在乳酸酰基脱水酶或苯基乳酸脱水酶的作用下,反应得到3‑烯‑丁酮酸;乳酸酰基脱水酶为重组酶CsLDAH,重组酶CsLDAH的氨基酸序列共有3个亚基,3个亚基的氨基酸和DNA序列为SEQ ID NO.9‑14;苯基乳酸脱水酶为重组酶CsPLDAH,重组酶CsPLDAH的氨基酸序列共有3个亚基,3个亚基的氨基酸和DNA序列为SEQ ID NO:15‑20;
(3)将制备得到的3‑烯‑丁酮酸中加入L‑谷氨酸脱氢酶和葡萄糖脱氢酶,反应得到L‑乙烯基甘氨酸,所述的L‑谷氨酸脱氢酶为重组酶CgGDH,重组酶CgGDH的氨基酸和DNA序列分别为SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.22;葡萄糖脱氢酶的氨基酸和DNA序列分别为SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.26。
2.根据权利要求1所述的多酶级联制备L‑乙烯基甘氨酸的方法,其特征在于:所述的苏氨酸为D型苏氨酸、L型苏氨酸、或DL型苏氨酸,经过脱氨反应得到羟基丁酮酸。
3.根据权利要求1所述的多酶级联制备L‑乙烯基甘氨酸的方法,其特征在于:步骤(1)中L‑氨基酸氧化酶替换为L‑氨基酸氧化酶变体酶A117N,所述的L‑氨基酸氧化酶突变体酶A117N的氨基酸和DNA序列分别为SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4。
4.根据权利要求1所述的多酶级联制备L‑乙烯基甘氨酸的方法,其特征在于:步骤(1)中D‑氨基酸氧化酶替换为D‑氨基酸氧化酶突变体酶CgDAAO‑E218D,D‑氨基酸氧化酶突变体酶CgDAAO‑E218D的氨基酸和DNA序列分别为SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8。
5.根据权利要求1所述的多酶级联制备L‑乙烯基甘氨酸的方法,其特征在于:步骤(3)中L‑谷氨酸脱氢酶替换为L‑谷氨酰胺脱氢酶突变体CgGDH‑Q113E,L‑谷氨酰胺脱氢酶突变体CgGDH‑Q113E的氨基酸和DNA序列分别为SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.24。
6.根据权利要求1‑5任一项所述的多酶级联制备L‑乙烯基甘氨酸的方法,其特征在于:
步骤(1)中采用缓冲溶液0.1‑0.3 mol/L Tris‑HCl,pH控制在5.5‑ 7.5, 反应温度为20‑35℃;步骤(2)中采用0.1‑0.3 mol/L Tris‑HCl缓冲液,pH控制在4.5‑7, 反应温度为15‑35℃;步骤(3)中采用0.1‑0.3 mol/L Tris‑HCl缓冲液或磷酸盐缓冲溶液,pH控制在pH 6.5‑
8.5, 反应温度为25‑55℃。