1.一种具有超氧化物歧化酶活性的双金属MOFs衍生物用于检测AFB1的用途,其特征在于,包括如下步骤:步骤1、单金属MOFs的制备:
首先,取一定量的三水合硝酸铜溶于超纯水中,记为A溶液;继而取一定量的均苯三甲酸溶于乙醇中,记为B溶液;随后通过磁力搅拌器使A溶液与B溶液充分混合,接着将混合溶液转移到聚四氟乙烯内衬的高压反应釜中加热,待冷却至室温,通过高速离心得到蓝色沉淀物;最后,经过超纯水和乙醇的多次清洗以及干燥步骤后,得到单金属MOFs,即Cu‑BTC;
步骤2、双金属MOFs的制备:
取一定量的Cu‑BTC分散于N,N‑二甲基甲酰胺中;随后在分散液中加入四水合氯化锰,通过磁力搅拌,使四水合氯化锰与其充分接触;接着将分散液转移到聚四氟乙烯内衬的高压反应釜中加热,待冷却至室温,通过高速离心得到蓝色沉淀物;最后,经过超纯水和乙醇的多次清洗以及干燥步骤后,得到双金属MOFs,即Cu@Mn‑BTC;
步骤3、双金属MOFs衍生物的制备:
将Cu@Mn‑BTC置于管式炉中通过设定的升温程序进行煅烧,得到双金属MOFs衍生物粉末样品,记为Cu@Mn‑C;
步骤4、羧基功能化磁珠Fe3O4的制备:
将六水合氯化亚铁溶于乙二醇中,随后加入乙酸钠和丙烯酸钠,通过磁力搅拌使其充分混合;将混合溶液转移到聚四氟乙烯内衬的高压反应釜中加热,待冷却至室温,通过高速离心得到深棕色沉淀物;最后,经过超纯水和乙醇的多次清洗以及干燥步骤后,得到Fe3O4;
步骤5、Cu@Mn‑C与Fe3O4磁珠的功能组装
首先,取一定量的N‑羟基硫代琥珀酰亚胺和1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺分别添加到Fe3O4分散液和Cu@Mn‑C分散液中,在室温下充分振荡,用于活化羧基;随后将AFB1适配体加入Fe3O4分散液中,AFB1适配体对应的半互补链c‑DNA加入到Cu@Mn‑C分散液中,室温下充分振荡,分别得到apt‑Fe3O4和c‑DNA‑MOFs;取一定量的apt‑Fe3O4和c‑DNA‑MOFs混合孵育得到AFB1比色检测平台,标记为AFCM;
步骤6、AFB1比色检测
向AFB1比色检测平台AFCM中分别加入不同浓度的AFB1进行竞争反应;随后使用磁铁进行磁控分离;最后将AFCM‑ AFB1上清液加入到磷酸缓冲溶液、甲硫氨酸、乙二胺四乙酸二钠、氯化硝基四氮唑蓝、去离子水和核黄素的混合溶液中,经过LED光源的照射,进行显色反应,紫外检测后可实现定量检测。
2.如权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤1中,A溶液中,三水合硝酸铜及超纯水的用量比为0.968 g:12 mL;B溶液中,均苯三甲酸及乙醇的用量比为0.42 g:12 mL;A溶液和B溶液的体积比为1:1。
3.如权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤1中,磁力搅拌器的转速设置为500 rpm,时长为30分钟;反应釜中加热温度为120 ℃,时长为12小时。
4.如权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤2中,Cu‑BTC、四水合氯化锰和N,N‑二甲基甲酰胺的用量比为0.15 g:0.8 g:10 mL;磁力搅拌器的转速设置为500 rpm,时长为30分钟;反应釜中,加热温度为90 ℃,时长为24小时。
5.如权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤3中,煅烧气氛为氮气,煅烧温度为400 ℃,时长为4小时,升温速率为5 ℃/min。
6.如权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤4中,六水合氯化亚铁、乙酸钠、丙烯酸钠、乙二醇的用量比为0.54 g:0.5 g:1.0 g: 25 mL;磁力搅拌器的转速设置为500 rpm,时长为30分钟;反应釜加热温度为200 ℃,时长为20小时。
7.如权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤5中,
使用的AFB1适配体序列为5’‑ GTTG GGCA CGTG TTGT CTCT CTGT GTCT CGTG CCCT TCGC TAGG CCCA CA‑NH2‑3’,对应的半互补链c‑DNA的序列为5’‑ATTG GGCC TAGC GAAG GGCA CGAG ACAC AGAG AGAC AACA CGTG CCCC GT‑NH2‑3';
N‑羟基硫代琥珀酰亚胺、1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺、Fe3O4分散液、AFB1适配体的用量比为100 μL:100 μL:10 mL:20 μL;
N‑羟基硫代琥珀酰亚胺、1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺、Cu@Mn‑C分散液、对应的半互补链c‑DNA的用量比为100 μL:100 μL:5 mL:20 μL;
apt‑Fe3O4和c‑DNA‑MOFs混合孵育时体积比为1:1;
N‑羟基硫代琥珀酰亚胺和1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺的浓度均为200 μmol/L;Fe3O4分散液的浓度为1 mg/mL;Cu@Mn‑C分散液的浓度为2 mg/mL,AFB1适配体和对应的半互补链c‑DNA的浓度均为100 mM/L。
8.如权利要求1所述的用途,其特征在于,步骤6中,AFCM、AFB1的体积比为4:1;
AFCM‑ AFB1上清液、磷酸缓冲溶液、去离子水、甲硫氨酸、乙二胺四乙酸二钠、氯化硝基四氮唑蓝、核黄素的用量比为50 μL:1.5 mL:0.25 mL:0.3 mL:0.3 mL:0.3 mL:0.3 mL;
其中,AFB1的浓度范围为1 1000 ng/mL;磷酸缓冲溶液的浓度为50 mmol/L,pH为7.8;
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甲硫氨酸、乙二胺四乙酸二钠、氯化硝基四氮唑蓝、核黄素的浓度分别为130 mmol/L、100 μmol/L、1.25 mmol/L、20 μmol/L。