1.一种生物膜包裹的载药蛋白纳米粒的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)丝素蛋白的提取:取10 g剪碎后的茧壳,置于Na2CO3水溶液中,100℃加热搅拌30 min后使用大量蒸馏水冲洗,以上对剪碎后的茧壳的处理过程重复三次后,60℃烘干得脱胶蚕丝,取5 g脱胶蚕丝置于50 mL LiBr水溶液中,65℃加热搅拌2 h,制得丝素蛋白水溶液,透析后离心收集上清液,即为丝素蛋白溶液,经冷冻干燥后得到固体粉末,于4℃环境下密封保存;
2)紫杉醇丝素蛋白纳米粒的制备:取紫杉醇溶于无水乙醇中,逐滴加入到步骤1)得到的丝素蛋白溶液中并搅拌,在较低的离心转速下离心5 min除去产物中絮状物,随后在较高的离心转速下离心20 min收集紫杉醇丝素蛋白纳米粒,蒸馏水洗涤3次,冻干后‑20℃环境下保存;
3)细菌外膜囊泡的提取:取大肠埃希菌培养液,离心收集上清液,使用0.45 μm滤膜过滤,而后将滤液放入超滤离心管中,继续离心至体积变为原来的20%,得到浓缩的细菌外膜囊泡混悬液;
4)细菌外膜囊泡包裹的紫杉醇丝素蛋白纳米粒的制备:采用高压挤出法制备细菌外膜囊泡包裹的紫杉醇丝素蛋白纳米粒,而后4℃环境下以20000 rpm离心1 h,收集沉淀即为目标产物。
2. 根据权利要求1所述的一种生物膜包裹的载药蛋白纳米粒的制备方法,其特征在于,步骤1)中,所述的Na2CO3水溶液的浓度是0.2 mol/L;所述的LiBr水溶液的浓度是9.5 mol/L;所述的透析采用的是分子量为12000 kDa的透析袋。
3. 根据权利要求1所述的一种生物膜包裹的载药蛋白纳米粒的制备方法,其特征在于,步骤2)中,所述的紫杉醇取样量是12.66 mg;所述的丝素蛋白溶液的浓度是3.78 mg/mL;所述的搅拌时间是75 min。
4. 根据权利要求1所述的一种生物膜包裹的载药蛋白纳米粒的制备方法,其特征在于,步骤2)中,所述的较低的离心转速为6000 rpm;所述的较高的离心转速为13000 rpm。
5. 根据权利要求1所述的一种生物膜包裹的载药蛋白纳米粒的制备方法,其特征在于,步骤4)中,所述的高压挤出法的具体步骤如下:取紫杉醇丝素蛋白纳米粒重悬,与浓缩的细菌外膜囊泡混悬液混合均匀,将混合液放于脂质体挤出仪中,经200 nm的聚碳酸酯膜挤出,挤出过程重复10次。