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专利号: 2022106662679
申请人: 大连工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种靶向修饰负载虾青素牛乳外泌体纳米制剂的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)将牛乳进行第一次离心,以去除牛乳中颗粒较大的脂肪杂质;

(2)取步骤(1)所得上清液调节pH值至4.6,以沉淀蛋白质杂质;

(3)将步骤(2)所得体系进行第二次离心,取上清液过滤,以去掉小颗粒沉淀杂质;

(4)取步骤(3)所得滤液进行第三次离心,取沉淀,即为牛乳外泌体;

(5)将牛乳外泌体与中性磷酸盐缓冲溶液充分溶解混匀,得到牛乳外泌体分散液;

(6)制备透明质酸‑二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇2000,其中透明质酸与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇2000的质量比为10:1;

(7)将步骤(5)所得牛乳外泌体分散液与步骤(6)所得透明质酸‑二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇2000按照质量比20:1混合,搅拌反应,获得透明质酸修饰的牛乳外泌体分散液;

(8)将虾青素溶解于醇中,得到虾青素醇溶液;将步骤(7)所得透明质酸修饰的牛乳外泌体分散液与虾青素醇溶液按照牛乳外泌体与虾青素的质量比为10:1混合;冰浴条件下间歇超声、冰上孵育循环多次,温育,即得到透明质酸修饰的负载虾青素的牛乳外泌体分散液;

(9)将步骤(8)所得透明质酸修饰的负载虾青素的牛乳外泌体分散液离心以除去未包埋的虾青素,通过旋转蒸发除去溶剂,得到透明质酸修饰的负载虾青素的牛乳外泌体纳米制剂。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(6)具体包括:先活化透明质酸中的羧基;然后,将二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇2000溶解于二甲基甲酰胺中,将二甲基甲酰胺溶解的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇2000与活化后的透明质酸溶液按照透明质酸与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇2000的质量比为10:1混合,在室温下搅拌12小时,透析纯化后获得透明质酸‑二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇2000。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,活化透明质酸中的羧基的方法:将透明质酸溶于水中,再加入N‑羟基硫代琥珀酰亚胺和1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺,以活化透明质酸中的羧基。

4. 根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(7)中4 ℃条件下搅拌反应12 24 h。

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5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(8)中:冰浴条件下间歇超声、冰上孵育循环多次具体为:间歇超声:在超声功率为200 250 W、冰浴条件下间歇超声处理2分钟,间歇超声处理程~序按照开启15 s/关闭15 s进行;

冰上孵育:间歇超声后,在冰上继续孵育2分钟;

前述间歇超声、冰上孵育步骤循环3次。

6. 根据权利要求5所述的方法,其特征在于,步骤(8)中超声功率为200 W。

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(8)中,在37℃下温育1小时。

8.由权利要求1‑7任一所述的方法制得的靶向修饰负载虾青素牛乳外泌体纳米制剂。