1.一种含有壳聚糖修饰氧化石墨烯的蚕丝‑蛛丝复合丝素蛋白纳米微球的制备方法,其特征在于包括以下步骤:步骤1):取洗净的蜘蛛丝,置于碳酸钠溶液中煮沸脱胶,并用水清洗,获得脱胶蜘蛛丝;
步骤2):将脱胶蜘蛛丝置于乙酸溶液中加热反应,反应后将所得混合溶液进行离心,收集上层清液,得到蛛丝蛋白混合溶液,在水中透析后,得到较纯的蛛丝蛋白溶液;
步骤3):取蚕丝,洗净后置于碳酸钠溶液中煮沸脱胶,并水清洗后,获得脱胶蚕丝;
步骤4):将脱胶蚕丝在溴化锂溶液中溶解,得到丝素蛋白混合溶液,在水中透析后,得到较纯的蚕丝蛋白溶液;
步骤5):将步骤2)得到的蛛丝蛋白溶液和步骤4)得到的蚕丝蛋白溶液混合均匀,低温保存后冷冻干燥,得到蚕丝‑蛛丝复合丝素蛋白溶液;
步骤6):将步骤5)得到的蚕丝‑蛛丝复合丝素蛋白溶液放入水中,溶解后置于磷酸缓冲液中,然后加入蛋白酶溶液,将所得混合溶液在水浴中加热,然后升温将蛋白酶灭活,降至室温静置,冷冻干燥得到蚕丝‑蛛丝复合丝素蛋白微球;
步骤7):将氧化石墨烯溶液、壳聚糖溶液、交联剂和催化剂混合后,搅拌反应使氧化石墨烯和壳聚糖共价结合,得到由壳聚糖修饰的氧化石墨烯水凝胶;低温保存后,冷冻干燥,得到壳聚糖修饰氧化石墨烯颗粒;
步骤8):将壳聚糖修饰氧化石墨烯颗粒和蚕丝‑蛛丝复合丝素蛋白微球分散在水中使其呈悬浮液,超声使其混合均匀,将所得混合溶液离心后取下层沉淀物,冷冻干燥,得到含有壳聚糖修饰氧化石墨烯的蚕丝‑蛛丝复合丝素蛋白纳米微球。
2.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于:步骤1)中,碳酸钠的浓度为0.3‑3.0wt%,蜘蛛丝与碳酸钠溶液的用量比为1g:(100‑300)mL,煮沸脱胶时间为20‑50分钟。
3.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于:步骤2)中,乙酸溶液的浓度为70‑90wt%,蜘蛛丝与乙酸溶液的用量比为1g:(30‑70)mL,加热反应温度为35‑72℃,反应时间4‑12小时,离心速度为8500‑14000转/分钟,离心时间为10‑20分钟,透析时间为30‑50小时。
4.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于:步骤3)中,碳酸钠的浓度为0.04‑
0.1wt%,蚕丝与碳酸钠溶液的用量比为1g:(200‑800)mL,煮沸脱胶时间为20‑50分钟。
5.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于:步骤4)中,溴化锂浓度为7‑10M,蚕丝与溴化锂溶液的用量比为1g:(20‑150)mL,透析时间为45‑85小时。
6.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于:步骤5)中,蛛丝蛋白溶液与蚕丝蛋白溶液混合的质量比为1:(5‑20),低温保存温度为(‑60)(‑20)℃,保存时间为8‑20小时,冷冻~干燥时间为16‑30小时。
7.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于:步骤6)中,蚕丝‑蛛丝复合丝素蛋白溶液的浓度为10‑15wt%,磷酸缓冲液的pH=7.5‑8.0,磷酸缓冲液与蚕丝‑蛛丝复合丝素蛋白溶液的混合体积比为1:(2‑5),蛋白酶溶液与蚕丝‑蛛丝复合丝素蛋白溶液的混合体积比为1:(30‑80),水浴加热温度为40‑70℃,加热时间为2‑5小时,蛋白酶灭活的升温温度至105℃并维持5‑15分钟,降至室温后静置时间为9‑20小时,冷冻干燥时间为16‑30小时。
8.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于:步骤7)中,氧化石墨烯溶液的浓度为2‑
9g/L,壳聚糖溶液的质量浓度为1‑10%,交联剂为质量浓度90‑98%的1‑(3‑二甲氨基丙基)‑
3‑乙基碳二亚胺盐酸盐溶液,催化剂为质量浓度95‑100%的N‑羟基琥珀酰亚胺溶液,混合溶液各组分的质量比为1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐:N‑羟基琥珀酰亚胺:壳聚糖=1:1:(3‑8);混合溶液搅拌反应时间12‑24小时;
冷冻干燥时间为24‑48小时。
9.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于:步骤8)中,壳聚糖修饰氧化石墨烯溶液的浓度为1‑20g/L,壳聚糖修饰氧化石墨烯溶液与蚕丝‑蛛丝复合丝素蛋白溶液的混合体积比为1:(10‑80),超声时间为20‑50分钟,离心速度为8000‑15000转/分钟,离心时间为20‑40分钟,冷冻干燥时间为24‑48小时。