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专利号: 2022105376595
申请人: 浙江理工大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-01
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种免疫磁性增强检测羊皮革的方法,其特征在于包括以下步骤:

步骤1:纳米CuO的制备:取硝酸铜溶液和碳酸钠溶液混匀,超声分散,在160‑200℃温度下反应4‑8h后,真空抽滤,将所得粉末先后用水、无水乙醇洗涤,最后干燥,得到纳米CuO;

步骤2:纳米免疫磁珠的制备:将草酸铁、十二烷二醇、葡聚糖及油酸加入到乙醇中溶解,得到混合溶液;将所得混合溶液加热反应后冷却,得到含有反应产物的冷却溶液;将冷却溶液中的反应产物洗涤后得到纳米免疫磁珠;

步骤3:功能化纳米磁珠微粒的制备:取纳米免疫磁珠,加水,超声分散均匀,再加入氯仿,无水乙醇,然后加入丙烯酰胺,乙腈和甲基丙烯酸,室温下快速搅拌,充分混匀后,加入引发剂偶氮二异丁腈,加热快速搅拌反应,利用外磁场进行固液分离,得到功能化纳米磁珠微粒,用无水乙醇和水反复洗涤,直至洗去多余的有机物;

步骤4:特异性磁珠的制备:将功能化纳米磁珠微粒加入到磷酸氢二钠‑磷酸二氢钠缓冲液中,超声分散;加入戊二醛溶液,水浴振荡反应;磁性分离固液相,用磷酸氢二钠‑磷酸二氢钠缓冲液清洗,将活化后的磁珠分散于磷酸氢二钠‑磷酸二氢钠缓冲液中,得到活化磁珠溶液,在活化磁珠溶液中加入羊皮革蛋白抗体并震荡,洗涤后加入BSA混匀反应,洗涤后得到特异性磁珠;

步骤5:特异性CuO的制备:取纳米CuO于PBS中超声,向所得分散液中加入羊皮革蛋白抗体,震荡;将其冷冻离心后移去上层清液,分散于PBS中,再冷冻离心后移去下层底物,加入BSA溶液,混匀反应,制得特异性CuO;

步骤6:将所得特异性磁珠和特异性CuO加入待测的羊皮革蛋白溶液中,震荡孵育,离心后移去上清液,置于双氧水中,将所得氧气通入压力传感器。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤1具体为:取25‑35mL 3‑7mg/mL的硝酸铜溶液和25‑35mL 8‑12mg/mL的碳酸钠溶液混匀,并超声分散0.5‑1h,在160‑200℃温度下反应4‑8h后,真空抽滤,将所得粉末先后用水、无水乙醇洗涤,最后在80‑100℃中干燥1.5‑2h,得到纳米CuO。

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤2具体为:将1.5‑2.5mmol草酸铁、8‑

12mol十二烷二醇、0.6‑1.0g葡聚糖及4‑8mol油酸加入20‑30mL乙醇中溶解,得到混合溶液;

将所得混合溶液在180‑250℃下反应5‑30min后冷却,得到含有反应产物的冷却溶液;将冷却溶液中的反应产物洗涤后得到免疫磁珠。

4.如权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤3具体为:取0.3‑0.5g纳米免疫磁珠,加入20mL水,超声分散均匀,再加入8‑12mL氯仿,2‑3mL无水乙醇,然后加入0.3‑0.7g丙烯酰胺,0.8‑1.2mL乙腈和2‑3mL甲基丙烯酸,室温下快速搅拌10‑30min,充分混匀后,加入0.08‑

0.12g引发剂偶氮二异丁腈,在40‑50℃下快速搅拌反应6‑8h,利用外磁场进行固液分离,得到功能化纳米磁珠微粒,用无水乙醇和水反复洗涤,直至洗去多余的有机物。

5.如权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤4具体为:取400‑600mg功能化纳米磁珠微粒,加入到80‑120mL磷酸氢二钠‑磷酸二氢钠缓冲液中,超声分散;加入150‑250mL浓度为

20‑30wt%的戊二醛溶液,在30‑40℃下水浴振荡反应2‑3h;磁性分离固液相,用PBS清洗3‑5遍,将活化后的磁珠分散于40‑60mL磷酸氢二钠‑磷酸二氢钠缓冲液中,得到8‑12mg/mL的活化磁珠溶液,分出350‑450uL活化磁珠溶液,加入80‑120uL羊皮革蛋白抗体溶液并震荡,洗涤后加入150‑250uL 2‑4%的BSA溶液混匀反应,洗涤后得到特异性磁珠。

6.如权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤5具体为:取0.8‑1.2mg纳米CuO于0.8‑

1.2mL PBS中超声0.5‑1.5h,向所得分散液中加入80‑120uL羊皮革蛋白抗体,500‑700rmp震荡3‑5h;将其冷冻离心后移去上层清液,分散于0.8‑1.2mL PBS中,再冷冻离心后移去下层底物,加入350‑450uL 2‑4%的BSA溶液,混匀反应20‑40min,制得特异性CuO。

7.如权利要求6所述的方法,其特征在于:步骤5中,第一次离心速率为8000‑12000rmp,时间10‑20min;第二次离心速率为800‑1200rmp,时间5‑15min。

8.如权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤6具体为:将所得特异性磁珠和特异性纳米CuO加入待检测的羊皮革蛋白溶液中,在30‑40℃条件下震荡孵育1‑3h,离心后移去上清液,置于双氧水中,将所得氧气通入压力传感器。