1.一种生产2‑羟基吩嗪的绿针假单胞菌,其特征是,利用基因方法将绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)Qlu‑1中的hppA基因、phoB基因和OmpR基因敲除获得;其中,绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)Qlu‑1的保藏编号为CCTCC NO:M2020108。
2.如权利要求1所述的生产2‑羟基吩嗪的绿针假单胞菌,其特征是,hppA基因、phoB基因和OmpR基因的序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.13所示。
3.一种权利要求1或2所述的生产2‑羟基吩嗪的绿针假单胞菌的制备方法,其特征是,包括采用敲除方法将绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)Qlu‑1中的连续将目标基因敲除的过程;所述目标基因为hppA基因、phoB基因和OmpR基因;
所述敲除方法的步骤如下:
根据目标基因及连接连接目标基因的上下游序列获得目标‑UD片段;
利用目标‑UD片段构建敲除质粒;
通过双亲杂交将敲除质粒导入至绿针假单胞菌Qlu‑1中;
筛选敲除目标基因的变异株。
4.如权利要求3所述的生产2‑羟基吩嗪的绿针假单胞菌的制备方法,其特征是,在已测序的绿针假单胞菌Qlu‑1基因组序列中搜索目标基因及其序列上下游序列,并通过PCR钓取并连接目标基因的上下游片段获得目标‑UD片段。
5.如权利要求3所述的生产2‑羟基吩嗪的绿针假单胞菌的制备方法,其特征是,hppA基因上游同源臂引物hppAF1和hppAR1分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示,hppA基因下游同源臂引物hppAF2和hppAR2分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示,获得的融合片段hppA‑UD如SEQ ID NO.6所示;
或,phoB基因上游同源臂引物phoBF1和phoBR1分别如SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9所示,phoB基因下游同源臂引物phoBF2和phoBR2分别如SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11所示,获得的融合片段phoB‑UD如SEQ ID NO.12所示;
或,OmpR基因上游同源臂引物OmpRF1和OmpRR1分别如SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15所示,OmpR基因下游同源臂引物OmpRF2和OmpRR2分别如SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17所示,获得的融合片段OmpR‑UD如SEQ ID NO.18所示。
6.如权利要求3所述的生产2‑羟基吩嗪的绿针假单胞菌的制备方法,其特征是,通过酶切连接技术将目标‑UD片段与质粒连接,构建敲除质粒;所述质粒优选为pk18moBsacB质粒。
7.如权利要求3所述的生产2‑羟基吩嗪的绿针假单胞菌的制备方法,其特征是,将敲除质粒导入至大肠杆菌中,然后将绿针假单胞菌Qlu‑1与导入敲除质粒的大肠杆菌进行共同培养,使得将敲除质粒导入至绿针假单胞菌Qlu‑1中。
8.如权利要求3所述的生产2‑羟基吩嗪的绿针假单胞菌的制备方法,其特征是,将待筛选的单菌落通过PCR筛选获得敲除目标基因的变异株。
9.一种权利要求1或2所述的绿针假单胞菌在利用生物发酵制备2‑羟基吩嗪中的应用。
10.如权利要求8所述的应用,其特征是,将上述绿针假单胞菌加入至含有吩嗪‑1‑羧酸的培养皿中进行发酵。