1.一种快速鉴定瓦氏黄颡鱼群体耐低氧能力的试剂盒,其特征在于,包括catalase、trypsin特异性正向引物和特异性反向引物;所述catalase特异正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1GTGAGCGCATTCCTGAACGG所示,特异反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2AGAGAACCTCACAGCGACCG所示;所述trypsin特异正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3GATCAAGCGAAGGACTTTGTGAAGAAC所示,特异反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4AGGATGAGGATGGAGGCAGAACC所示。
2.根据权利要求1所述的快速鉴定瓦氏黄颡鱼群体耐低氧能力的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括qRT‑PCR反应缓冲液和蒸馏水。
3.根据权利要求2所述的快速鉴定瓦氏黄颡鱼群体耐低氧能力的试剂盒,其特征在于,所述qRT‑PCR反应缓冲液为2×Taq Pro Universal SYBR Green qPCR Master Mix。
4.一种权利要求1所述试剂盒的鉴定方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)提取待测瓦氏黄颡鱼肝脏样品的RNA,反转录,得到cDNA;
(2)以步骤(1)所得cDNA为模板,利用所述试剂盒进行qRT‑PCR反应,计算得到catalase、trypsin的相对表达量,通过catalase相对表达量是否在1.5‑2.5和trypsin相对表达量是否在0.2‑0.6判断待测瓦氏黄颡鱼样品的耐低氧能力。
5.根据权利要求4所述试剂盒的鉴定方法,其特征在于,步骤(1)中,所述提取方法包括硅胶膜纯化技术。
6.根据权利要求4所述试剂盒的鉴定方法,其特征在于,步骤(2)中,所述qRT‑PCR反应体系,每20‑50μL包括:cDNA模板2‑5μL、特异性正向引物0.4‑1μL、特异性反向引物0.4‑1μL、qRT‑PCR反应缓冲液10‑25μL和蒸馏水7.2‑18μL。
7.根据权利要求4所述试剂盒的鉴定方法,其特征在于,步骤(2)中,所述qRT‑PCR反应体系的反应程序为:95℃30s,然后扩增40个循环,每个循环反应程序为95℃10s,60℃30s,最后熔解,程序为95℃15s,60℃60s,95℃15s。
8.根据权利要求4所述试剂盒的鉴定方法,其特征在于,步骤(2)中,所述判断方法为当至少满足一个区间时,说明该群体耐低氧能力一般;当catalase和trypsin相对表达量都在
0.9‑1.1时,说明该群体耐低氧能力好;若两个都不满足说明该群体耐低氧能力差。
9.根据权利要求4所述试剂盒的鉴定方法,其特征在于,步骤(1)中,所述瓦氏黄颡鱼肝脏样品为鱼体长12‑14cm,体重11‑20g的瓦氏黄颡鱼低氧处理12小时的肝脏组织。