1.一种鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及它们的杂交黄颡鱼的引物,其特征在于,所述引物序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2。
2.一种鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及它们的杂交黄颡鱼的试剂盒,包括PCR反应液和引物,其特征在于,所述引物的序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。
3.一种鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及它们的杂交黄颡鱼的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)提取待鉴定的黄颡鱼或瓦氏黄颡鱼或杂交黄颡鱼DNA;
2)用序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物对待鉴定样本DNA进行PCR扩增,获得PCR产物;
3)PCR产物在ABI 3500xl分析仪上进行毛细管电泳并进行图谱分析,与DL600Marker标准图谱进行对比,在220bp位置扩增出1条特异性DNA条带的,则鉴定为普通黄颡鱼;在243bp位置扩增出1条特异性DNA条带的,则鉴定为瓦氏黄颡鱼;在220bp和243bp位置各扩增出1条特异性DNA条带的,则鉴定为杂交黄颡鱼。
4.如权利要求3所述的鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及它们的杂交黄颡鱼的方法,其特征在于,PCR体系为10μL:即为在200μL PCR反应管中加入M13-FAM 0.16μL、灭菌水5.77μL,10×含Mg2+缓冲液1.77μL、2mM的dNTPs 1μL、5U的Taq酶0.1μL、浓度为10pm/μL的上游荧光引物
0.04μL,浓度为10pm/μL的下游引物0.16μL,待鉴定样品的DNA样本1μL;所述上游荧光引物是序列SEQ ID No.1所示引物的荧光标记形式,下游引物的序列如SEQ ID No.2所示。
5.如权利要求3所述的鉴别黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼及它们的杂交黄颡鱼的方法,其特征在于,所述PCR扩增的反应条件为:94℃预变性5min,32个循环:94℃变性30sec,58℃下退火
45sec,72℃延伸45sec,之后94℃预变性5min,8个循环:94℃变性30sec,53℃下退火45sec,
72℃延伸45sec,最后72℃延伸10min,4℃保存。