1.一种提取水体表面混合摇蚊科昆虫蜕皮总DNA的方法,其特征在于按如下的步骤进行:(1)去河流、湖泊的下风口处且有少许白色泡沫的岸边,采集摇蚊科蛹皮;
(2)将采集的摇蚊蛹皮用95%的酒精浸泡5分钟,浸泡两次,之后用蒸馏水冲洗三次,洗去蛹皮上的杂质;
(3)用生理盐水浸泡蛹皮两个小时,使蛹皮上残存的细胞恢复活性以方便提取DNA;
(4)将蛹皮放入37℃水浴锅恒温保存2小时;
(5)把处理过的蛹皮放入研钵中,加入解离液充分研磨;所述的解离液200ml的组成如下:后用去离子水补至200ml;
(6)将样品转移至200ul的试剂盒中,使DNA与蛋白质分离并且稳定的核酸结合到硅胶膜上;
(7)将无水乙醇加入到裂解物中,上样到离心柱上,4℃10000转/min离心;
(8)缓冲液洗涤杂质,低盐洗脱出DNA,干燥处理;
(9)用100μL的TE溶解DNA沉淀,得到DNA提取液;
所述TE的pH为8.0;
(10)PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分离后检测;
PCR反应体系如下:
总体系50ul:ddH2O 32.4ul,10×PCR Buffer 5ul,2.5mmol/L的dNTPs 4ul,10umol/L的通用引物LCO和HCO各2ul,500U,2.5U/ul的Taq酶0.6ul,DNA模板4ul;
PCR反应条件如下:
94℃预变性5min;94℃变性10s;55℃退火30s;72℃延伸60s;35个循环;72℃延伸
10min;4℃保存。
2.权利要求1所述方法在用于提取水体表面混合摇蚊科昆虫蜕皮总DNA方面的应用。