1.一种提取水体表面混合摇蚊科昆虫蜕皮总DNA的方法,其特征在于按如下的步骤进行:(1)去河流、湖泊的下风口处尤其是有少许白色泡沫的岸边,采集摇蚊科蛹皮;
(2)将采集的摇蚊蛹皮用95%的酒精浸泡5分钟,浸泡两次,之后用蒸馏水冲洗三次,洗去蛹皮上的杂质;
(3)用生理盐水浸泡蛹皮两个小时,使蛹皮上残存的细胞恢复活性以方便提取DNA;
(4)将蛹皮放入37°水浴锅恒温保存2小时;
(5)把处理过的蛹皮放入研钵中,加入解离液充分研磨;所述的解离液200 ml的组成如下(W/W):CTAB 4g 终浓度2%SDS 1g 终浓度0.5%
0.5M EDTA 8 ml 终浓度0.02M
1M Tris‑HCl 20 ml 终浓度0.1M
5M NaCl 40 ml 终浓度1Mβ‑巯基乙醇 0.2 ml 终浓度0.1%后用去离子水补至200 ml;
(6)将样品转移至200ul的试剂盒中,使DNA与蛋白质分离并且稳定的核酸结合到硅胶膜上;
(7)将无水乙醇加入到裂解物中,上样到离心柱上,4°10000转/min离心;
(8)缓冲液洗涤杂质,低盐洗脱出DNA,干燥处理;
(9)用100μL的TE (pH8.0) 溶解DNA沉淀, 得到DNA提取液;
(10)PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分离后检测。
2.专利要求1所述方法在用于高效高质量提取水体表面混合摇蚊科昆虫蜕皮总DNA方面的应用。