1. 一种香榧内生真菌代谢产物的制备方法,其特征在于所述代谢产物按如下方法制备:(1)将橘绿木霉(Trichoderma citrinoviride) Tg.Z4‑01发酵液经超声波细胞破碎后抽滤,滤液及滤渣用乙酸乙酯萃取,收集有机相浓缩至恒重,获得代谢粗产物;所述橘绿木霉(Trichoderma citrinoviride) Tg.Z4‑01保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为:CCTCC NO:M 2022156,保藏日期为2022年2月25日,保藏地址:湖北省武汉市武昌区珞珈山武汉大学生命科学学院,邮编:430072;(2)将步骤(1)代谢粗产物用乙酸乙酯溶解后进行硅胶色谱柱层析,以体积比依次为100:0、100:1、100:2、100:5、100:10、100:20、50:50、0:
100的二氯甲烷‑甲醇梯度洗脱,收集体积比100:2二氯甲烷‑甲醇的流出液,浓缩至干,记为组分Fr.6;(3)将步骤(2)组分Fr.6用乙酸乙酯溶解后再次进行硅胶色谱柱层析,以体积比
10:1‑5:1石油醚‑乙酸乙酯为流动相洗脱,收集第8个柱体积的流出液,浓缩至干,记为组分Fr.6‑8;(4)组分Fr.6‑8以体积比70:30的甲醇‑水为洗脱剂进行ODS柱分离,收集Rf值为0.6的流出液,浓缩至干,记为组分Fr.6‑8‑8;(5)步骤(4)组分Fr.6‑8‑8用少量乙酸乙酯溶解,上样于制备型薄层色谱板中,以二氯甲烷和甲醇为展开剂进行薄层层析,将Rf为0 .6的黄色条带用刀片刮下,收集刮下的硅胶用二氯甲烷为溶剂进行洗脱,收集洗脱液,浓缩至干,获得内生真菌代谢产物。
2. 如权利要求1所述香榧内生真菌代谢产物的制备方法,其特征在于步骤(1)所述发酵液按如下方法制备:将橘绿木霉Tg.Z4‑01接种于发酵培养基中,28 ℃,180 r/min培养5 d,获得发酵液;所述发酵培养基组成:蛋白胨10 g/L,蔗糖40 g/L,溶剂为蒸馏水,pH为5.6。
3. 如权利要求1所述香榧内生真菌代谢产物的制备方法,其特征在于步骤(1)所述代谢粗产物按如下方法制备:在40%功率条件下,每超声3s,间歇4s,进行30 min对发酵液超声细胞破碎处理后抽滤,滤液用等体积乙酸乙酯萃取3次,滤渣用乙酸乙酯浸泡12 h,合并有机相,浓缩至恒重的制备方法,获得代谢粗产物。
4.如权利要求2所述香榧内生真菌代谢产物的制备方法,其特征在于步骤(2)的具体操作过程为:将步骤(1)代谢粗产物用乙酸乙酯溶解,加入硅胶,混合均匀后,真空干燥,即为吸附样品的硅胶;将吸附样品的硅胶上样于硅胶色谱柱中,采用体积比依次为100:0、100:
1、100:2、100:5、100:10、100:20、50:50、0:100的二氯甲烷‑甲醇梯度洗脱,收集体积比100:
2二氯甲烷‑甲醇的流出液,浓缩至干,记为组分Fr.6;所述硅胶与代谢粗产物质量比为1:1。
5.如权利要求1所述香榧内生真菌代谢产物的制备方法,其特征在于步骤(3)的具体操作过程为:将步骤(2)组分Fr.6用乙酸乙酯溶解,加入硅胶,混合均匀后,真空干燥,即为吸附组分Fr.6的硅胶;将吸附组分Fr.6的硅胶上样于硅胶色谱柱中,以体积比10:1‑5:1石油醚‑乙酸乙酯为流动相洗脱,收集第8个柱体积的流出液,浓缩至干,记为组分Fr.6‑8;所述硅胶与组分Fr.6质量比为1:1。
6.如权利要求1所述香榧内生真菌代谢产物的制备方法,其特征在于步骤(5)中制备型薄层色谱板为20cm×20cm,二氯甲烷:甲醇的体积比20:1。
7.如权利要求1所述香榧内生真菌代谢产物的制备方法,其特征在于以体积比依次为
100:0、100:1、100:2、100:5、100:10、100:20、50:50、0:100的二氯甲烷‑甲醇梯度洗脱,每组梯度分别洗脱十个柱体积。
8.一种采用权利要求1所述的制备方法制备得到的香榧内生真菌代谢产物作为抗氧化剂的应用。