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专利号: 202210321645X
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-08-12
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1. 一种香榧内生真菌代谢产物的制备方法,其特征在于包括如下步骤:(1)将橘绿木霉(Trichoderma citrinoviride) Tg.Z4‑01发酵液经超声破碎后抽滤,滤液及滤渣用乙酸乙酯萃取,取有机相浓缩至恒重,获得代谢粗产物;所述橘绿木霉(Trichoderma citrinoviride) Tg.Z4‑01保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为:CCTCC NO:M 

2022156,保藏日期为2022年2月25日,保藏地址:湖北省武汉市武昌区珞珈山武汉大学生命科学学院,邮编:430072;(2)将步骤(1)代谢粗产物用乙酸乙酯溶解后进行硅胶柱层析,以体积比依次为100:0、100:1、100:2、100:5、100:10、100:20、50:50、0:100的二氯甲烷‑甲醇梯度洗脱,收集体积比100:5二氯甲烷‑甲醇的流出液,浓缩至干,记为组分Fr.7;(3)将步骤(2)组分Fr.7用乙酸乙酯溶解后再次进行硅胶柱层析,以体积比15:1‑0:1二氯甲烷‑乙酸乙酯为流动相洗脱,收集流出液,浓缩至干,记为组分Fr.7‑5;(4)组分Fr.7‑5以体积比5:3的石油醚:乙酸乙酯为洗脱剂进行硅胶柱层析,收集流出液,浓缩至干,记为组分Fr.7‑5‑1;

(5)将步骤(4)组分Fr.7‑5‑1用乙酸乙酯进行重结晶后得香榧内生真菌代谢产物。

2. 如权利要求1所述香榧内生真菌代谢产物的制备方法,其特征在于步骤(1)所述发酵液按如下方法制备:将橘绿木霉Tg.Z4‑01接种于发酵培养基中,28 ℃,180 r/min条件下培养5 d,获得发酵液;所述发酵培养基组成:蛋白胨10 g/L,蔗糖40 g/L,溶剂为蒸馏水,pH为5.6。

3. 如权利要求1所述香榧内生真菌代谢产物的制备方法,其特征在于步骤(1)所述代谢粗产物按如下方法制备:在40%功率条件下,每超声3s,间歇4s,进行30 min对发酵液超声破壁处理后抽滤,滤液用等体积乙酸乙酯萃取3次,滤渣用乙酸乙酯浸泡12 h,合并有机相,浓缩至恒重,获得橘绿木霉Tg.Z4‑01代谢粗产物。

4.如权利要求1所述香榧内生真菌代谢产物的制备方法,其特征在于步骤(2)的具体操作过程为:将步骤(1)橘绿木霉Tg.Z4‑01代谢粗产物用乙酸乙酯溶解,加入硅胶,混合均匀后,挥干溶剂,即为吸附样品的硅胶;将吸附样品的硅胶上样于硅胶色谱柱中,装柱量3/4,采用体积比依次为100:0、100:1、100:2、100:5、100:10、100:20、50:50、0:100的二氯甲烷‑甲醇梯度洗脱,收集体积比100:5二氯甲烷‑甲醇的流出液,浓缩至干,记为组分Fr.7;所述硅胶与代谢粗产物质量比为1:1。

5.如权利要求1所述香榧内生真菌代谢产物的制备方法,其特征在于步骤(3)的具体操作为:将步骤(2)组分Fr.7用乙酸乙酯溶解,加入硅胶,混合均匀后,挥干溶剂,即为吸附组分Fr.7的硅胶,将吸附组分Fr.7的硅胶上样于硅胶色谱柱中,装柱量3/4,以体积比依次为

15:1,10:1,7:1,5:1,2:1,1:1,0:1的二氯甲烷‑乙酸乙酯为流动相梯度洗脱,每75mL收集一份,收集第21‑27份的流出液,浓缩至干,记为组分Fr.7‑5;所述硅胶与组分Fr.7质量比为1:

1。

6.如权利要求1所述香榧内生真菌代谢产物的制备方法,其特征在于步骤(4)的具体操作过程为:将步骤(3)组分Fr.7‑5用乙酸乙酯溶解,加入硅胶,混合均匀后,挥干溶剂,即为吸附组分Fr.7‑5的硅胶,将吸附组分Fr.7‑5的硅胶上样于硅胶色谱柱中,装柱量3/4,以体积比5:3的石油醚:乙酸乙酯为洗脱剂进行硅胶柱层析,每10mL收集一份,收集得到15‑19份均有浅黄色晶体析出,浓缩至干,记为组分Fr.7‑5‑1;所述硅胶与组分Fr.7‑5质量比为1:1。

7.如权利要求1所述香榧内生真菌代谢产物的制备方法,其特征在于步骤(5)的具体操作过程为:将步骤(4)组分Fr.7‑5‑1用乙酸乙酯进行重结晶,用石油醚将晶体中少量黄色物质洗去,用氮吹仪将晶体吹干后得香榧内生真菌代谢产物。

8.一种采用如权利要求1所述的制备方法制备得到的香榧内生真菌代谢产物作为抑菌剂的应用。