1. 一种沉默/缺失调控水稻镉积累的基因PK1或其编码蛋白在培育镉污染修复农作物中的应用,其特征在于,所述基因PK1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,所述编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示,所述镉污染修复农作物的作物种类为水稻。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,其应用的方法包括如下步骤:利用基因编辑技术沉默/缺失目标作物受体中的基因PK1并得到纯合突变体,所述纯合突变体即为所述的镉污染修复农作物;
所述基因编辑利用的靶点sgR‑PK1的正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示,反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示,这对引物体外互补形成双链克隆至中间载体上,然后通过酶切的方法克隆至目标载体中,得到含有PK1基因靶序列的目标载体,目标载体通过热击转入农杆菌中,通过组织培养的方法转化至水稻进行过表达,拿到转基因株系后,提取叶片DNA,利用测序引物M‑F和M‑R通过PCR的方法扩增靶序列附近的DNA片段,最终通过测序的方法获得纯合突变体;
所述测序引物M‑F和M‑R的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6所示。
3. 一种沉默/缺失调控水稻镉积累的基因PK1或其编码蛋白培育得到的镉污染修复农作物在修复土壤镉污染中的应用,其特征在于,所述基因PK1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,所述编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示,所述镉污染修复农作物的作物种类为水稻。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,其应用的方法包括如下步骤:利用基因编辑技术沉默/缺失目标作物受体中的基因PK1并得到纯合突变体;
所述基因编辑利用的靶点sgR‑PK1的正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示,反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示,这对引物体外互补形成双链克隆至中间载体上,然后通过酶切的方法克隆至目标载体中,得到含有PK1基因靶序列的目标载体,目标载体通过热击转入农杆菌中,通过组织培养的方法转化至水稻进行过表达,拿到转基因株系后,提取叶片DNA,利用测序引物M‑F和M‑R通过PCR的方法扩增靶序列附近的DNA片段,最终通过测序的方法获得纯合突变体,将其种植于镉污染土壤的大田,连续种植多年后即能实现土壤镉污染的修复;
所述测序引物M‑F和M‑R的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6所示。