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专利号: 2022102816004
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种免标记比率荧光型检测抗原方法,其特征在于,包括以下步骤:对包含有CRISPR的识别DNA序列的单链进行设计,使其包含一段目标抗原的适配体,并通过数个连续的T碱基与识别DNA序列间隔,构建出组分A;

以目标抗原作为靶标,在96孔板上修饰目标抗原的抗体,并用牛血清白蛋白来封闭非特异性结合位点,构建出组分B;

适配体与目标抗原结合后,CRISPR/Cas12a被固定在目标抗原表面并被激活,激活后可以剪切一切单链为2‑4个碱基的片段,此时加入polyT和primer DNA,均会被剪成碎片;

将表面羧基化的二氧化硅微球与末端修饰有氨基的DNA链相连,另一条辅助DNA与修饰有氨基的DNA链互补配对形成双链,构建出组分C;

另一条辅助DNA与修饰有氨基的DNA链互补配对形成双链,此双链具有粘性末端,DAPI染料会嵌入双链,从而发出强的蓝色荧光,未嵌入双链的DAPI荧光很弱;

将待检测物中加入组分A和组分B和组分C和铜离子和抗坏血酸和DAPI染料和核酸外切酶I I I;

检测待检测物的红色荧光和蓝色荧光,以比率荧光法进行目标抗原检测;

体系中存在目标抗原,则CRISPR/Cas12a会被固定,即不存在polyT和primer DNA,不存在polyT,则无法合成Cu纳米簇,红色荧光弱;不存在primer DNA,则核酸外切酶III无法剪切二氧化硅微球上的双链,DAPI的荧光强。

2.根据权利要求1所述的一种免标记比率荧光型检测抗原方法,其特征在于,其中,检测待检测物的红色荧光和蓝色荧光,进行目标抗原检测,主要包括:如果待检测物中存在目标抗原:

则目标抗原与组分A的适配体连接,同时目标抗原与组分B的抗体结合,则不存在单链DNA,即不存在polyT和primer DNA;

由于不存在polyT,则无法与铜离子和抗坏血酸结合发出Cu纳米簇,红色荧光弱;

由于不存在primer DNA,则不存在primer DNA与组分C的粘性末端互补配对,则组分C无法被核酸外切酶III剪切,DAPI染料可嵌入组分C的双链,蓝色荧光强;

则:

如果待检测物中目标抗原含量越低,则红色荧光越强且蓝色荧光越弱;

则:

令X=蓝色荧光强度:红色荧光强度

X值越大,目标抗原含量越高;X值越小,目标抗原含量越低。